人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定
인원성대장암항원기인서균체표체문고적구건급감정
Construction and identification of the cDNA phage expression library for human colorectal cancer antigens
  • 万方数据
    第一军医大学学报 제일군의대학학보
    JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
    2003年 6期 538-541，545 ,共5页

    刘宇虎%张振书%钟东%武金宝%但汉雷%杨兴龙%杨晓强%陈学清%赖卓胜%肖冰

    류우호%장진서%종동%무금보%단한뢰%양흥룡%양효강%진학청%뢰탁성%초빙

    结肠直肠肿瘤%噬菌体%抗体,细菌%抗原基因%cDNA文库 結腸直腸腫瘤%噬菌體%抗體,細菌%抗原基因%cDNA文庫
    결장직장종류%서균체%항체,세균%항원기인%cDNA문고
    目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库.转化E.coli XL1-B1ue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用Sfi Ⅰ酶切鉴定插入的cDNA片段大小.结果构建成含2.39×106pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600～4000bp,平均长约1400bp.结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因.
    목적구건인원성대장암항원기인cDNA서균체표체문고.방법종인대장암조직중제취총RNA,용RT-PCR합성cDNA제1련,용LD-PCR합성cDNA제2련,제거소우500p적소편단,여거린산화적λTriplEx2서균체좌、우비련접,체외포장,구건성cDNA서균체표체문고.전화E.coli XL1-B1ue감수태세포,적정문고적적도,학정문고용량대소;용ITPG유도화X-gal현색측정중조솔;용Sfi Ⅰ매절감정삽입적cDNA편단대소.결과구건성함2.39×106pfu/ml중조서균체적인대장암항원기인cDNA서균체표체문고,중조솔위97.5%,삽입cDNA편단대소범위종600～4000bp,평균장약1400bp.결론성공구건고질량인원성대장암항원기인cDNA서균체표체문고,괄합우대비량사선cDNA극륭적대장암상관항원기인.
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