微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2001年
5期
523-529
,共7页
陈三凤%管乐%应娇妍%李周华%王娟%李季伦
陳三鳳%管樂%應嬌妍%李週華%王娟%李季倫
진삼봉%관악%응교연%리주화%왕연%리계륜
巴西固氮螺菌%glnB基因%glnZ基因%突变株%固氮酶活性
巴西固氮螺菌%glnB基因%glnZ基因%突變株%固氮酶活性
파서고담라균%glnB기인%glnZ기인%돌변주%고담매활성
在巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)中,glnB和glnZ是两个高度同源基因,分别位于3.7kb/EcoRI+PstI和3.7kb/SalI的两个不同的染色体片段上.用卡那霉素盒(Kmr-cas-sette)插入法,对glnB和glnZ分别进行定位诱变,并获得相应的突变株,即glnB-和glnZ-.研究表明,glnB-突变株丧失固氮酶活性,表现为Nif-,而glnZ-象野生型菌株一样具有固氮酶活性.为了进一步研究这两个基因的功能,将glnB和glnZ分别构建在pVK100载体上形成重组质粒pVK-Ⅱ和pVK-Z,对glnB-和glnZ突变株进行互补实验,进一步证明了glnB与固氮酶活有直接相关性,而glnZ无此作用.同时,通过三亲接合法将pVK-Ⅱ和pVK-Z分别转移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗铵能力的draT-突变株中,使glnB和glnZ的拷贝数增加,进一步比较它们的固氮酶活性.结果表明多拷贝的glnB基因,能显著提高固氮酶活性,而多拷贝的glnZ对固氮酶活性无影响.同时,将pVK-Ⅱ和pVK-Z分别转移到nifA-突变株中,结果表明glnB和glnZ均不能恢复nifA-的固氮酶活性.
在巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)中,glnB和glnZ是兩箇高度同源基因,分彆位于3.7kb/EcoRI+PstI和3.7kb/SalI的兩箇不同的染色體片段上.用卡那黴素盒(Kmr-cas-sette)插入法,對glnB和glnZ分彆進行定位誘變,併穫得相應的突變株,即glnB-和glnZ-.研究錶明,glnB-突變株喪失固氮酶活性,錶現為Nif-,而glnZ-象野生型菌株一樣具有固氮酶活性.為瞭進一步研究這兩箇基因的功能,將glnB和glnZ分彆構建在pVK100載體上形成重組質粒pVK-Ⅱ和pVK-Z,對glnB-和glnZ突變株進行互補實驗,進一步證明瞭glnB與固氮酶活有直接相關性,而glnZ無此作用.同時,通過三親接閤法將pVK-Ⅱ和pVK-Z分彆轉移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗銨能力的draT-突變株中,使glnB和glnZ的拷貝數增加,進一步比較它們的固氮酶活性.結果錶明多拷貝的glnB基因,能顯著提高固氮酶活性,而多拷貝的glnZ對固氮酶活性無影響.同時,將pVK-Ⅱ和pVK-Z分彆轉移到nifA-突變株中,結果錶明glnB和glnZ均不能恢複nifA-的固氮酶活性.
재파서고담라균(Azospirillum brasilense)중,glnB화glnZ시량개고도동원기인,분별위우3.7kb/EcoRI+PstI화3.7kb/SalI적량개불동적염색체편단상.용잡나매소합(Kmr-cas-sette)삽입법,대glnB화glnZ분별진행정위유변,병획득상응적돌변주,즉glnB-화glnZ-.연구표명,glnB-돌변주상실고담매활성,표현위Nif-,이glnZ-상야생형균주일양구유고담매활성.위료진일보연구저량개기인적공능,장glnB화glnZ분별구건재pVK100재체상형성중조질립pVK-Ⅱ화pVK-Z,대glnB-화glnZ돌변주진행호보실험,진일보증명료glnB여고담매활유직접상관성,이glnZ무차작용.동시,통과삼친접합법장pVK-Ⅱ화pVK-Z분별전이도파서고담라균야생형Yu62화구유일정항안능력적draT-돌변주중,사glnB화glnZ적고패수증가,진일보비교타문적고담매활성.결과표명다고패적glnB기인,능현저제고고담매활성,이다고패적glnZ대고담매활성무영향.동시,장pVK-Ⅱ화pVK-Z분별전이도nifA-돌변주중,결과표명glnB화glnZ균불능회복nifA-적고담매활성.
