南京医科大学学报(自然科学版)
南京醫科大學學報(自然科學版)
남경의과대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING MEDICAL UNIVERSITY
2003年
2期
109-111
,共3页
徐江英%许琳%戴荣%华超%卢是月%彭光勇
徐江英%許琳%戴榮%華超%盧是月%彭光勇
서강영%허림%대영%화초%로시월%팽광용
硫氧还蛋白还原酶%序列分析%原核表达%人类
硫氧還蛋白還原酶%序列分析%原覈錶達%人類
류양환단백환원매%서렬분석%원핵표체%인류
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白.方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白.结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99%;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55 ku.TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF2080 1 8.结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础.
目的:剋隆人硫氧還蛋白還原酶(TR)基因併構建原覈錶達載體,穫得TR蛋白.方法:採用反轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術,從人胚腦組織中擴增齣TR cDNA片段,剋隆至pGEM-T載體併轉化大腸桿菌DH5α,穫得重組質粒pGEM-TR;經序列分析證實後,提取pGEM-TR重組體,由雙酶切得到目的片段,併插入pET9c原覈錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3),穫得重組質粒pET-rhTR.異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導pET-rhTR在BL21中錶達,用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)及免疫蛋白印跡(Western blot)分析重組蛋白.結果:剋隆的TR cDNA與人胎盤組織TR cDNA同源性為99%;pET-rhTR在大腸桿菌中高效錶達,目的蛋白佔菌體總蛋白量的36%,其分子質量為55 ku.TR cDNA序列被GenBank收錄,登錄號為AF2080 1 8.結論:成功剋隆瞭人腦組織來源的TR基因,該基因在大腸桿菌中得到高錶達,為進一步研究其功能奠定基礎.
목적:극륭인류양환단백환원매(TR)기인병구건원핵표체재체,획득TR단백.방법:채용반전록취합매련식반응(RT-PCR)기술,종인배뇌조직중확증출TR cDNA편단,극륭지pGEM-T재체병전화대장간균DH5α,획득중조질립pGEM-TR;경서렬분석증실후,제취pGEM-TR중조체,유쌍매절득도목적편단,병삽입pET9c원핵표체질립,전화대장간균BL21(DE3),획득중조질립pET-rhTR.이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도pET-rhTR재BL21중표체,용SDS-취병희선알응효전영(PAGE)급면역단백인적(Western blot)분석중조단백.결과:극륭적TR cDNA여인태반조직TR cDNA동원성위99%;pET-rhTR재대장간균중고효표체,목적단백점균체총단백량적36%,기분자질량위55 ku.TR cDNA서렬피GenBank수록,등록호위AF2080 1 8.결론:성공극륭료인뇌조직래원적TR기인,해기인재대장간균중득도고표체,위진일보연구기공능전정기출.
