中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2002年
12期
839-843
,共5页
史须%李卓娅%龚非力%冯纬%徐勇%熊平
史鬚%李卓婭%龔非力%馮緯%徐勇%熊平
사수%리탁아%공비력%풍위%서용%웅평
核因子-κB TNF-α 启动子 脂多糖 亲和力
覈因子-κB TNF-α 啟動子 脂多糖 親和力
핵인자-κB TNF-α 계동자 지다당 친화력
目的:探讨TNF-α启动子中3个κB位点在调节基因转录中的作用及其与核蛋白作用的亲和力关系.方法:用含不同调节区域的重组报告基因进行HL-60细胞的基因转染,检测LPS刺激前后及κB3反义寡核苷酸封闭后的报告基因表达水平;提取LPS刺激6 h的HL-60的细胞核蛋白,用凝胶迁移率改变实验及竞争结合实验比较NF-κB与TNF-α的3个NF-κB位点的亲和力.结果:尽管TNF-α基因中3个κB位点都参与该基因的诱导和非诱导性转录调节,但κB3位点的作用更为重要;3个κB位点能同LPS刺激和非刺激的HL-60细胞核蛋白发生特异性结合,但LPS刺激的蛋白-DNA复合物电泳条带明显增粗,尤其κB3位点出现2条明显的特异性条带;3个κB位点与LPS诱导后HL-60核蛋白的亲和力强弱顺序依次为:κB2＞κB1＞κB3.结论:TNF-α基因的3个κB位点都能与NF-κB结合,从而参与调节HL-60细胞TNF-α组成性表达和LPS诱导性表达.尽管κB3位点在对LPS刺激的反应性中发挥的作用最大,但这种效应与其同核蛋白亲和力的大小无关.
目的:探討TNF-α啟動子中3箇κB位點在調節基因轉錄中的作用及其與覈蛋白作用的親和力關繫.方法:用含不同調節區域的重組報告基因進行HL-60細胞的基因轉染,檢測LPS刺激前後及κB3反義寡覈苷痠封閉後的報告基因錶達水平;提取LPS刺激6 h的HL-60的細胞覈蛋白,用凝膠遷移率改變實驗及競爭結閤實驗比較NF-κB與TNF-α的3箇NF-κB位點的親和力.結果:儘管TNF-α基因中3箇κB位點都參與該基因的誘導和非誘導性轉錄調節,但κB3位點的作用更為重要;3箇κB位點能同LPS刺激和非刺激的HL-60細胞覈蛋白髮生特異性結閤,但LPS刺激的蛋白-DNA複閤物電泳條帶明顯增粗,尤其κB3位點齣現2條明顯的特異性條帶;3箇κB位點與LPS誘導後HL-60覈蛋白的親和力彊弱順序依次為:κB2＞κB1＞κB3.結論:TNF-α基因的3箇κB位點都能與NF-κB結閤,從而參與調節HL-60細胞TNF-α組成性錶達和LPS誘導性錶達.儘管κB3位點在對LPS刺激的反應性中髮揮的作用最大,但這種效應與其同覈蛋白親和力的大小無關.
목적:탐토TNF-α계동자중3개κB위점재조절기인전록중적작용급기여핵단백작용적친화력관계.방법:용함불동조절구역적중조보고기인진행HL-60세포적기인전염,검측LPS자격전후급κB3반의과핵감산봉폐후적보고기인표체수평;제취LPS자격6 h적HL-60적세포핵단백,용응효천이솔개변실험급경쟁결합실험비교NF-κB여TNF-α적3개NF-κB위점적친화력.결과:진관TNF-α기인중3개κB위점도삼여해기인적유도화비유도성전록조절,단κB3위점적작용경위중요;3개κB위점능동LPS자격화비자격적HL-60세포핵단백발생특이성결합,단LPS자격적단백-DNA복합물전영조대명현증조,우기κB3위점출현2조명현적특이성조대;3개κB위점여LPS유도후HL-60핵단백적친화력강약순서의차위:κB2＞κB1＞κB3.결론:TNF-α기인적3개κB위점도능여NF-κB결합,종이삼여조절HL-60세포TNF-α조성성표체화LPS유도성표체.진관κB3위점재대LPS자격적반응성중발휘적작용최대,단저충효응여기동핵단백친화력적대소무관.
