第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
5期
429-432
,共4页
李姁君%韩锋产%闫小君%苏成芝
李姁君%韓鋒產%閆小君%囌成芝
리후군%한봉산%염소군%소성지
螺杆菌幽门细胞%毒素相关基因%基因克隆%基因表达%温度诱导
螺桿菌幽門細胞%毒素相關基因%基因剋隆%基因錶達%溫度誘導
라간균유문세포%독소상관기인%기인극륭%기인표체%온도유도
目的分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cagA中间区cag1,cag2,并利用大肠杆菌系统表达. 方法 PCR法扩增cagA基因,双脱氧中止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220, 受控于PRPL启动子, 转化大肠杆菌DH5α,42℃进行温度诱导. 结果 PCR分段扩增出cagA中间区基因cag1, cag2, 分别为975,755 bp, 克隆入pUC19质粒,测序正确;在pBV中构建cag1, cag2的重组表达载体pBVcagA1, pBVcagA2, 工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带, Mr: Cag1 36×103, Cag2 27.9×103,均与预期的cagA蛋白Mr一致,约占菌体总蛋白的36%和24%. 结论成功克隆分段扩增的cagA中间区基因,并可在大肠杆菌DH5α中高效表达.
目的分段擴增、剋隆幽門螺桿菌毒素相關基因cagA中間區cag1,cag2,併利用大腸桿菌繫統錶達. 方法 PCR法擴增cagA基因,雙脫氧中止法測序正確後,剋隆入大腸桿菌錶達載體pBV220, 受控于PRPL啟動子, 轉化大腸桿菌DH5α,42℃進行溫度誘導. 結果 PCR分段擴增齣cagA中間區基因cag1, cag2, 分彆為975,755 bp, 剋隆入pUC19質粒,測序正確;在pBV中構建cag1, cag2的重組錶達載體pBVcagA1, pBVcagA2, 工程菌誘導後SDS-PAGE顯示新生錶達蛋白帶, Mr: Cag1 36×103, Cag2 27.9×103,均與預期的cagA蛋白Mr一緻,約佔菌體總蛋白的36%和24%. 結論成功剋隆分段擴增的cagA中間區基因,併可在大腸桿菌DH5α中高效錶達.
목적분단확증、극륭유문라간균독소상관기인cagA중간구cag1,cag2,병이용대장간균계통표체. 방법 PCR법확증cagA기인,쌍탈양중지법측서정학후,극륭입대장간균표체재체pBV220, 수공우PRPL계동자, 전화대장간균DH5α,42℃진행온도유도. 결과 PCR분단확증출cagA중간구기인cag1, cag2, 분별위975,755 bp, 극륭입pUC19질립,측서정학;재pBV중구건cag1, cag2적중조표체재체pBVcagA1, pBVcagA2, 공정균유도후SDS-PAGE현시신생표체단백대, Mr: Cag1 36×103, Cag2 27.9×103,균여예기적cagA단백Mr일치,약점균체총단백적36%화24%. 결론성공극륭분단확증적cagA중간구기인,병가재대장간균DH5α중고효표체.
