中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
1期
59-63
,共5页
耿朝晖%郜鹏%刘莹%赵东明%张宝珠%俞新大%李建民
耿朝暉%郜鵬%劉瑩%趙東明%張寶珠%俞新大%李建民
경조휘%고붕%류형%조동명%장보주%유신대%리건민
Bac-to-Bac系统%昆虫细胞%hGH基因%表达
Bac-to-Bac繫統%昆蟲細胞%hGH基因%錶達
Bac-to-Bac계통%곤충세포%hGH기인%표체
利用Bac-to-Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素(humah growth hormone,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中,得到pFastBac-hGH,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,发生转座作用,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid-hGH.纯化DNA,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV-Bac-hGH.经酶切PCR及Southern杂交鉴定,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下,SDS-PAGE测得产物蛋白分子量为22 kD左右.用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达18μg/ml,与用传统的BEVS表达hGH相比,转染上清中hGH表达水平提高400倍以上.
利用Bac-to-Bac桿狀病毒載體錶達繫統將人生長激素(humah growth hormone,hGH)基因cDNA剋隆至轉移載體pFastBac1中,得到pFastBac-hGH,再將其轉化進入含穿梭載體Bacmid的受體菌DH10Bac中,髮生轉座作用,得到含hGH基因的重組穿梭載體rBacmid-hGH.純化DNA,直接轉染培養的昆蟲細胞Sf9,得到重組病毒rAcV-Bac-hGH.經酶切PCR及Southern雜交鑒定,hGH基因正確地插入病毒基因組的多角體蛋白基因啟動子下,SDS-PAGE測得產物蛋白分子量為22 kD左右.用免疫化學髮光法測得轉染上清中hGH錶達水平可達18μg/ml,與用傳統的BEVS錶達hGH相比,轉染上清中hGH錶達水平提高400倍以上.
이용Bac-to-Bac간상병독재체표체계통장인생장격소(humah growth hormone,hGH)기인cDNA극륭지전이재체pFastBac1중,득도pFastBac-hGH,재장기전화진입함천사재체Bacmid적수체균DH10Bac중,발생전좌작용,득도함hGH기인적중조천사재체rBacmid-hGH.순화DNA,직접전염배양적곤충세포Sf9,득도중조병독rAcV-Bac-hGH.경매절PCR급Southern잡교감정,hGH기인정학지삽입병독기인조적다각체단백기인계동자하,SDS-PAGE측득산물단백분자량위22 kD좌우.용면역화학발광법측득전염상청중hGH표체수평가체18μg/ml,여용전통적BEVS표체hGH상비,전염상청중hGH표체수평제고400배이상.
