武警医学院学报
武警醫學院學報
무경의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE CPAPF
2003年
5期
336-339
,共4页
吴立华%刁世勇%蔡英林%韩忠朝
吳立華%刁世勇%蔡英林%韓忠朝
오립화%조세용%채영림%한충조
腺病毒%血小板第四因子%人脐静脉内皮细胞%抑制作用
腺病毒%血小闆第四因子%人臍靜脈內皮細胞%抑製作用
선병독%혈소판제사인자%인제정맥내피세포%억제작용
目的:用一种简便方法构建了含血小板第四因子(PF4)cDNA的腺病毒载体,体外检测其抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性.方法:将含有信号肽的PF4cDNA克隆至腺病毒穿梭质粒pAdshuttle-CMV中,形成转移质粒pAdshuttle/PF4,将之用PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,抽提并鉴定含目的基因的重组体质粒,PacI酶切后用磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒AdPF4.经鉴定后扩增、纯化、测病毒滴度及感染率.直接转导HUVEC检测表达蛋白活性.结果:经鉴定此病毒DNA有PF4cDNA插入,病毒滴度可达1×1010pfu/ml,转导AdPF4病毒后的人脐静脉内皮细胞较对照含空载体病毒增殖减低53%.结论:实验证实腺病毒介导的PF4cDNA体外具有抑制内皮细胞增殖活性.
目的:用一種簡便方法構建瞭含血小闆第四因子(PF4)cDNA的腺病毒載體,體外檢測其抑製人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)活性.方法:將含有信號肽的PF4cDNA剋隆至腺病毒穿梭質粒pAdshuttle-CMV中,形成轉移質粒pAdshuttle/PF4,將之用PmeI酶切線性化後與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1共轉化大腸桿菌BJ5183,抽提併鑒定含目的基因的重組體質粒,PacI酶切後用燐痠鈣共沉澱方法轉染HEK293細胞,包裝成重組腺病毒AdPF4.經鑒定後擴增、純化、測病毒滴度及感染率.直接轉導HUVEC檢測錶達蛋白活性.結果:經鑒定此病毒DNA有PF4cDNA插入,病毒滴度可達1×1010pfu/ml,轉導AdPF4病毒後的人臍靜脈內皮細胞較對照含空載體病毒增殖減低53%.結論:實驗證實腺病毒介導的PF4cDNA體外具有抑製內皮細胞增殖活性.
목적:용일충간편방법구건료함혈소판제사인자(PF4)cDNA적선병독재체,체외검측기억제인제정맥내피세포(HUVEC)활성.방법:장함유신호태적PF4cDNA극륭지선병독천사질립pAdshuttle-CMV중,형성전이질립pAdshuttle/PF4,장지용PmeI매절선성화후여선병독골가질립pAdEasy-1공전화대장간균BJ5183,추제병감정함목적기인적중조체질립,PacI매절후용린산개공침정방법전염HEK293세포,포장성중조선병독AdPF4.경감정후확증、순화、측병독적도급감염솔.직접전도HUVEC검측표체단백활성.결과:경감정차병독DNA유PF4cDNA삽입,병독적도가체1×1010pfu/ml,전도AdPF4병독후적인제정맥내피세포교대조함공재체병독증식감저53%.결론:실험증실선병독개도적PF4cDNA체외구유억제내피세포증식활성.
