慢病毒介导的稳定表达bFGF的胎儿肝脏基质细胞株的建立
만병독개도적은정표체bFGF적태인간장기질세포주적건립
Establishment of Fetal Liver Stroma Cell Lines Which Stably Express Basic Fibroblast Growth Factor by Lentiviral System
  • 万方数据
    生物化学与生物物理进展 생물화학여생물물리진전
    PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
    2007年 2期 207-214 ,共8页

    习佳飞%王韫芳%张鹏%袁红丰%施双双%闫舫%陈琳%白慈贤%南雪%裴雪涛

    습가비%왕운방%장붕%원홍봉%시쌍쌍%염방%진림%백자현%남설%배설도

    胎儿肝脏%基质细胞%慢病毒%碱性成纤维细胞生长因子%转基因%人胚胎干细胞 胎兒肝髒%基質細胞%慢病毒%堿性成纖維細胞生長因子%轉基因%人胚胎榦細胞
    태인간장%기질세포%만병독%감성성섬유세포생장인자%전기인%인배태간세포
    通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长特性和表面标志的鉴定,其在体外维持传代35代,依然保持正常的染色体核型.从胎儿骨髓间充质干细胞中克隆得到bFGF基因,构建重组慢病毒载体,感染FLSC,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的低表达和高表达bFGF的两株细胞,RT-PCR和蛋白质印迹证实,细胞株中bFGF基因的稳定表达.RT-PCR结果显示,弱荧光和强荧光表达细胞的bFGF,在mRNA水平的表达分别是转染空载体细胞的2.33倍和6.19倍;蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达分别是1.76倍和5.05倍.用建立的bFGF/FLSC作饲养层细胞体外培养人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hES),结果证明,其能在无或少量添加外源bFGF的条件下,维持人ES细胞增殖及其干性达20代.bFGF/FLSC细胞株的建立,将为构建低成本、安全高效的人胚胎干细胞的培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境.
    통과중조만병독계통감염인태인간장기질세포(fetal liver stromal cell,FLSC),건립료능구은정、고효표체감성성섬유세포생장인자(basic fibroblast growth factor,bFGF)적세포주bFGF/FLSC.종유산태인간장조직분리부집기질세포,대기진행료생장특성화표면표지적감정,기재체외유지전대35대,의연보지정상적염색체핵형.종태인골수간충질간세포중극륭득도bFGF기인,구건중조만병독재체,감염FLSC,근거형광표체강약진행류식분선,획득능구계속은정전대적저표체화고표체bFGF적량주세포,RT-PCR화단백질인적증실,세포주중bFGF기인적은정표체.RT-PCR결과현시,약형광화강형광표체세포적bFGF,재mRNA수평적표체분별시전염공재체세포적2.33배화6.19배;단백질인적결과현시,재단백질수평표체분별시1.76배화5.05배.용건립적bFGF/FLSC작사양층세포체외배양인배태간세포(human embryonic stem cells,hES),결과증명,기능재무혹소량첨가외원bFGF적조건하,유지인ES세포증식급기간성체20대.bFGF/FLSC세포주적건립,장위구건저성본、안전고효적인배태간세포적배양체계급연구조혈세포적발육분화제공괄의적미배경.
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