江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
2期
26-29
,共4页
黄晶晶%常菊花%陈楚芹%沈晋良%沈文飚
黃晶晶%常菊花%陳楚芹%瀋晉良%瀋文飚
황정정%상국화%진초근%침진량%침문표
棉铃虫%钙黏蛋白%原核表达%多克隆抗体
棉鈴蟲%鈣黏蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體
면령충%개점단백%원핵표체%다극륭항체
通过RT-PCR扩增出棉铃虫中肠钙黏蛋白毒素结合区编码基因片段Cad-tb,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,并在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,获得融合表达的包涵体,经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用ELISA检测其效价.结果显示,以pET-30a-Cad-tb表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导成功获得分子量为37 ku左右的重组蛋白,单抗-His的Western blot鉴定其正确表达.纯化后的蛋白成功免疫新西兰大白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16 000.
通過RT-PCR擴增齣棉鈴蟲中腸鈣黏蛋白毒素結閤區編碼基因片段Cad-tb,將其剋隆到pET-30a原覈錶達載體中,併在大腸桿菌菌株BL21(DE3)中經IPTG誘導錶達,穫得融閤錶達的包涵體,經過變性、Ni-NTA柱親和純化、複性等方法處理包涵體,穫得可溶性純化蛋白,用純化後的蛋白免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體,利用ELISA檢測其效價.結果顯示,以pET-30a-Cad-tb錶達載體轉化BL21菌後,經IPTG誘導成功穫得分子量為37 ku左右的重組蛋白,單抗-His的Western blot鑒定其正確錶達.純化後的蛋白成功免疫新西蘭大白兔,穫得瞭該蛋白的多剋隆抗體,ELISA檢測其效價高于1∶16 000.
통과RT-PCR확증출면령충중장개점단백독소결합구편마기인편단Cad-tb,장기극륭도pET-30a원핵표체재체중,병재대장간균균주BL21(DE3)중경IPTG유도표체,획득융합표체적포함체,경과변성、Ni-NTA주친화순화、복성등방법처리포함체,획득가용성순화단백,용순화후적단백면역신서란대백토제비다극륭항체,이용ELISA검측기효개.결과현시,이pET-30a-Cad-tb표체재체전화BL21균후,경IPTG유도성공획득분자량위37 ku좌우적중조단백,단항-His적Western blot감정기정학표체.순화후적단백성공면역신서란대백토,획득료해단백적다극륭항체,ELISA검측기효개고우1∶16 000.
