CAJ | 학술논문

为了从单卵泡水平建立非闭锁大小卵泡颗粒细胞基因表达的消减文库,选择繁殖性能正常、空怀高繁殖力黄淮山羊2只,以氯前列烯醇处理40 h后取卵巢,计数卵泡并测量卵泡直径,钝性分离采集卵泡颗粒细胞,置于液氮内保存,取样后的卵泡部分组织采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行闭锁鉴定.选择直径6和4 mm非闭锁卵泡,提取颗粒细胞mRNA,扩增cDNA,监测抑制消减杂交及其文库构建的试验环节.结果表明:消减文库的阳性克隆测序成功率100%,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,发现12个全新表达序列标签;应用RT-PCR对已知序列的抑制素βA亚基基因(INHBA)和谷胱甘肽S-转移酶Al基因(GSTA1)进行表达水平测定,证实了颗粒细胞2个基因mRNA的表达模式与差异显示的结果相同.表明消减文库构建成功.
위료종단란포수평건립비폐쇄대소란포과립세포기인표체적소감문고,선택번식성능정상、공부고번식력황회산양2지,이록전렬희순처리40 h후취란소,계수란포병측량란포직경,둔성분리채집란포과립세포,치우액담내보존,취양후적란포부분조직채용원위결구말단표기법(TUNEL)진행폐쇄감정.선택직경6화4 mm비폐쇄란포,제취과립세포mRNA,확증cDNA,감측억제소감잡교급기문고구건적시험배절.결과표명:소감문고적양성극륭측서성공솔100%,종정향문고중수궤도취96개극륭진행차이표체적사선,발현12개전신표체서렬표첨;응용RT-PCR대이지서렬적억제소βA아기기인(INHBA)화곡광감태S-전이매Al기인(GSTA1)진행표체수평측정,증실료과립세포2개기인mRNA적표체모식여차이현시적결과상동.표명소감문고구건성공.