农学学报
農學學報
농학학보
Chinese Countryside Well-off Technology
2011年
3期
22-28
,共7页
余德亿%姚锦爱%胡进锋%黄鹏%方大琳%陈峰
餘德億%姚錦愛%鬍進鋒%黃鵬%方大琳%陳峰
여덕억%요금애%호진봉%황붕%방대림%진봉
实蝇%基因组DNA提取%ISSR-PCR反应体系%建立
實蠅%基因組DNA提取%ISSR-PCR反應體繫%建立
실승%기인조DNA제취%ISSR-PCR반응체계%건립
为探讨高品质实蝇基因组DNA提取,研究模板DNA浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度及时间对ISSR-PCR扩增结果的影响,以3种实蝇为材料,建立通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系.结果表明:获得了高品质实蝇基因组DNA;确立了通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系:10×PCR Buffer 2.5μL,模板DNA 50 ng,引物0.25μmol/L,Taq DNA聚合酶0.50 U,dNTP 200umol/L,最后加ddH2O至25 μL;明确了ISSR-PCR扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性30s,52.4℃退火45 s,72℃延伸90 s,循环36次,最后72℃延伸7 min,4℃保存.体系的建立弥补了实蝇传统形态检测的不足,为快速准确鉴定、种群异质性及遗传多样性分析奠定了基础.
為探討高品質實蠅基因組DNA提取,研究模闆DNA濃度、引物濃度、Taq DNA聚閤酶用量、dNTP濃度、退火溫度及時間對ISSR-PCR擴增結果的影響,以3種實蠅為材料,建立通用且穩定的實蠅ISSR-PCR反應體繫.結果錶明:穫得瞭高品質實蠅基因組DNA;確立瞭通用且穩定的實蠅ISSR-PCR反應體繫:10×PCR Buffer 2.5μL,模闆DNA 50 ng,引物0.25μmol/L,Taq DNA聚閤酶0.50 U,dNTP 200umol/L,最後加ddH2O至25 μL;明確瞭ISSR-PCR擴增程序:94℃預變性5 min,94℃變性30s,52.4℃退火45 s,72℃延伸90 s,循環36次,最後72℃延伸7 min,4℃保存.體繫的建立瀰補瞭實蠅傳統形態檢測的不足,為快速準確鑒定、種群異質性及遺傳多樣性分析奠定瞭基礎.
위탐토고품질실승기인조DNA제취,연구모판DNA농도、인물농도、Taq DNA취합매용량、dNTP농도、퇴화온도급시간대ISSR-PCR확증결과적영향,이3충실승위재료,건립통용차은정적실승ISSR-PCR반응체계.결과표명:획득료고품질실승기인조DNA;학립료통용차은정적실승ISSR-PCR반응체계:10×PCR Buffer 2.5μL,모판DNA 50 ng,인물0.25μmol/L,Taq DNA취합매0.50 U,dNTP 200umol/L,최후가ddH2O지25 μL;명학료ISSR-PCR확증정서:94℃예변성5 min,94℃변성30s,52.4℃퇴화45 s,72℃연신90 s,순배36차,최후72℃연신7 min,4℃보존.체계적건립미보료실승전통형태검측적불족,위쾌속준학감정、충군이질성급유전다양성분석전정료기출.
