中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2011年
3期
187-190
,共4页
陶千山%罗欣%柴瑜%胡道军%张胜权
陶韆山%囉訢%柴瑜%鬍道軍%張勝權
도천산%라흔%시유%호도군%장성권
IL-15%启动子%双荧光素酶报告基因
IL-15%啟動子%雙熒光素酶報告基因
IL-15%계동자%쌍형광소매보고기인
目的 克隆人白介素-15(IL-15)基因系列启动子,构建IL-15基因启动子荧光素酶报告基因载体.方法 通过PCR方法 从HaCaT细胞基因组DNA中获得IL-15基因编码序列5'上游七段逐步缺失的IL-15启动子序列;双酶切后,分别重组到含萤火虫荧光素酶的报告基因pGL3-Basic载体上,构建IL-15基因系列启动子报告基因载体;用脂质体转染法将含最长启动子序列的报告基因载体转染至HaCaT细胞,并设置空白对照组和LPS组分别处理;24 h后采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性.结果 经PCR方法 扩增出七段逐步缺失的IL-15基因启动子片段,PCR及双酶切鉴定各重组体构建正确;瞬时转染HaCaT细胞后经报告基因检测得知所克隆最长序列具有启动子活性.结论 成功构建了IL-15系列启动子报告基因载体,并在HaCaT细胞中初步活性分析得知所克隆 IL-15基因调控系列内包含启动子核心区域,为进一步研究IL-15表达调控机制奠定了实验基础.
目的 剋隆人白介素-15(IL-15)基因繫列啟動子,構建IL-15基因啟動子熒光素酶報告基因載體.方法 通過PCR方法 從HaCaT細胞基因組DNA中穫得IL-15基因編碼序列5'上遊七段逐步缺失的IL-15啟動子序列;雙酶切後,分彆重組到含螢火蟲熒光素酶的報告基因pGL3-Basic載體上,構建IL-15基因繫列啟動子報告基因載體;用脂質體轉染法將含最長啟動子序列的報告基因載體轉染至HaCaT細胞,併設置空白對照組和LPS組分彆處理;24 h後採用雙熒光素酶報告基因繫統檢測其啟動子活性.結果 經PCR方法 擴增齣七段逐步缺失的IL-15基因啟動子片段,PCR及雙酶切鑒定各重組體構建正確;瞬時轉染HaCaT細胞後經報告基因檢測得知所剋隆最長序列具有啟動子活性.結論 成功構建瞭IL-15繫列啟動子報告基因載體,併在HaCaT細胞中初步活性分析得知所剋隆 IL-15基因調控繫列內包含啟動子覈心區域,為進一步研究IL-15錶達調控機製奠定瞭實驗基礎.
목적 극륭인백개소-15(IL-15)기인계렬계동자,구건IL-15기인계동자형광소매보고기인재체.방법 통과PCR방법 종HaCaT세포기인조DNA중획득IL-15기인편마서렬5'상유칠단축보결실적IL-15계동자서렬;쌍매절후,분별중조도함형화충형광소매적보고기인pGL3-Basic재체상,구건IL-15기인계렬계동자보고기인재체;용지질체전염법장함최장계동자서렬적보고기인재체전염지HaCaT세포,병설치공백대조조화LPS조분별처리;24 h후채용쌍형광소매보고기인계통검측기계동자활성.결과 경PCR방법 확증출칠단축보결실적IL-15기인계동자편단,PCR급쌍매절감정각중조체구건정학;순시전염HaCaT세포후경보고기인검측득지소극륭최장서렬구유계동자활성.결론 성공구건료IL-15계렬계동자보고기인재체,병재HaCaT세포중초보활성분석득지소극륭 IL-15기인조공계렬내포함계동자핵심구역,위진일보연구IL-15표체조공궤제전정료실험기출.
