CAJ | 학술논문

目的建立耐异烟肼(isoniazid, INH)结核分枝杆菌多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析(multiple-polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism, multi-PCR-SSCP)方法,快速、特异地同时检出aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况,用于快速诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性.方法根据结核分枝杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用multi-PCR及SSCP技术,同时检测对结核分枝杆菌耐INH起作用的这3个基因的突变情况.结果对H37 Rv标准株、临床分离INH敏感株(23株)及INH耐药株(35株)分别采用常规PCR和multi-PCR同时进行扩增,两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段,且结果符合率达100%;采用单基因PCR-SSCP,aphC启动子序列突变检出率17%(6/35)、inhA序列突变检出率20%(7/35)、katG序列突变检出率66%(23/35);multi-PCR-SSCP突变检出率83%(29/35). 结论耐药基因检测指导治疗是一种新探索,multi-PCR-SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测结核分枝杆菌aphC启动子、inhA、katG 3个INH耐药基因的突变,提高检验效率,有望成为临床指导用药的好方法.
목적건립내이연정(isoniazid, INH)결핵분지간균다중취합매련반응-단련구상다태성분석(multiple-polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism, multi-PCR-SSCP)방법,쾌속、특이지동시검출aphC계동자、inhA、katG기인적돌변정황,용우쾌속진단결핵분지간균대INH적내약성.방법근거결핵분지간균적aphC계동자서렬、inhA서렬、katG서렬,분별설계출3대특이성과취핵감산인물,채용multi-PCR급SSCP기술,동시검측대결핵분지간균내INH기작용적저3개기인적돌변정황.결과대H37 Rv표준주、림상분리INH민감주(23주)급INH내약주(35주)분별채용상규PCR화multi-PCR동시진행확증,량충확증방법균능확증출예기적목적편단,차결과부합솔체100%;채용단기인PCR-SSCP,aphC계동자서렬돌변검출솔17%(6/35)、inhA서렬돌변검출솔20%(7/35)、katG서렬돌변검출솔66%(23/35);multi-PCR-SSCP돌변검출솔83%(29/35). 결론내약기인검측지도치료시일충신탐색,multi-PCR-SSCP방법민감、특이,능동시쾌속유효지검측결핵분지간균aphC계동자、inhA、katG 3개INH내약기인적돌변,제고검험효솔,유망성위림상지도용약적호방법.