CAJ | 학술논문

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性.方法:经常规RT-PCR法从HCV RNA阳性病人的血清中扩增出HCV E1区的基因片段,经EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体P cDNA3中,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析.结果:RT-PCR扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3连接,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切后产生了预期大小的144bp的片段 .测序后其核苷酸序列与已经报道的HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为72.8%、93.25% 、61.96%和56.44%;其推定的氨基酸序列的同源性分别为77.3%、95.7%、54.6%和51.35%;与已经报道的中国株的同源性为95.06%和93.25%;属HCV Ⅱ型; 经计算机辅助分析表明该片段内含有4个可能的糖基化位点,1个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有2个和1个抗原决定簇, 而每一个抗原决定簇内均含有1个糖基化位点,该片段内还含有2个T细胞识别位点.结论:本实验克隆的HCV E1基因属Ⅱ型,为我国流行的基因型,其基因的一级结构具备进行有关HCV核酸免疫的研究条件,其真核表达载体的构建,为进一步研究HCV E1基因的功能及HCV基因免疫的研究创造了条件.
목적:건립병형간염병독포막구기인적진핵표체재체,병통과대기서렬분석천명기작위기인접충적가능성.방법:경상규RT-PCR법종HCV RNA양성병인적혈청중확증출HCV E1구적기인편단,경EcoR Ⅰ화Xba Ⅰ쌍매절후장기극륭도진핵표체재체P cDNA3중,양성극륭경Sma Ⅰ화Xba Ⅰ쌍매절감정;용쌍탈양종지법측서,동시이용계산궤연건대기추정적안기산서렬진행분석.결과:RT-PCR확증산물경매절과야후여경과동양쌍매절적진핵표체재체PcDNA3련접,양성극륭경Sma Ⅰ화Xba Ⅰ매절후산생료예기대소적144bp적편단 .측서후기핵감산서렬여이경보도적HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ형적동원성분별위72.8%、93.25% 、61.96%화56.44%;기추정적안기산서렬적동원성분별위77.3%、95.7%、54.6%화51.35%;여이경보도적중국주적동원성위95.06%화93.25%;속HCV Ⅱ형; 경계산궤보조분석표명해편단내함유4개가능적당기화위점,1개과막구,기안기단위신호태서렬,재과막구적량단분별함유2개화1개항원결정족, 이매일개항원결정족내균함유1개당기화위점,해편단내환함유2개T세포식별위점.결론:본실험극륭적HCV E1기인속Ⅱ형,위아국류행적기인형,기기인적일급결구구비진행유관HCV핵산면역적연구조건,기진핵표체재체적구건,위진일보연구HCV E1기인적공능급HCV기인면역적연구창조료조건.