济宁医学院学报
濟寧醫學院學報
제저의학원학보
JOURNAL OF JINING MEDICAL COLLEGE
2007年
1期
29-32
,共4页
朱伟%山长武%陈廷%罗兵
硃偉%山長武%陳廷%囉兵
주위%산장무%진정%라병
LMP2A%BZLF1%融合基因%腺病毒%表达载体
LMP2A%BZLF1%融閤基因%腺病毒%錶達載體
LMP2A%BZLF1%융합기인%선병독%표체재체
目的 构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体.方法 逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(spliced overlap exetension,SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3 的DNA 序列进行连接,构建融合基因Z2A.将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack-CMV 质粒上,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因Z2A真核表达载体pAd-Z2A.经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-Z2A.结果 重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切,电泳后可观察到长31kb和4.5kb两条DNA条带,测序鉴定结果表明序列正确;从感染重组腺病毒vAd-Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达.结论 本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体,为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础.
目的 構建EB病毒(EBV)潛伏膜蛋白2A(LMP2A)編碼基因和即刻早期基因(BZLF1)融閤基因的重組腺病毒錶達載體.方法 逆轉錄-聚閤酶鏈反應分彆穫得LMP2A和BZLF1編碼序列的cDNA,採用剪接式重疊延伸(spliced overlap exetension,SOE)技術將兩段基因通過多肽接頭(Gly4Ser)3 的DNA 序列進行連接,構建融閤基因Z2A.將融閤基因Z2A定嚮亞剋隆到pAdTrack-CMV 質粒上,在原覈細胞E.coli BJ5183中完成穿梭質粒與骨架質粒pAdEasy-1的同源重組,構建融閤基因Z2A真覈錶達載體pAd-Z2A.經抗生素培養闆篩選重組體,然後轉染293細胞,穫得複製缺陷型重組腺病毒vAd-Z2A.結果 重組腺病毒載體經限製性覈痠內切酶酶切,電泳後可觀察到長31kb和4.5kb兩條DNA條帶,測序鑒定結果錶明序列正確;從感染重組腺病毒vAd-Z2A的293細胞中檢測到融閤基因Z2A的錶達.結論 本研究成功地構建瞭EBV LMP2A和BZLF1融閤基因Z2A重組腺病毒錶達載體,為進一步研究Z2A的功能提供瞭實驗基礎.
목적 구건EB병독(EBV)잠복막단백2A(LMP2A)편마기인화즉각조기기인(BZLF1)융합기인적중조선병독표체재체.방법 역전록-취합매련반응분별획득LMP2A화BZLF1편마서렬적cDNA,채용전접식중첩연신(spliced overlap exetension,SOE)기술장량단기인통과다태접두(Gly4Ser)3 적DNA 서렬진행련접,구건융합기인Z2A.장융합기인Z2A정향아극륭도pAdTrack-CMV 질립상,재원핵세포E.coli BJ5183중완성천사질립여골가질립pAdEasy-1적동원중조,구건융합기인Z2A진핵표체재체pAd-Z2A.경항생소배양판사선중조체,연후전염293세포,획득복제결함형중조선병독vAd-Z2A.결과 중조선병독재체경한제성핵산내절매매절,전영후가관찰도장31kb화4.5kb량조DNA조대,측서감정결과표명서렬정학;종감염중조선병독vAd-Z2A적293세포중검측도융합기인Z2A적표체.결론 본연구성공지구건료EBV LMP2A화BZLF1융합기인Z2A중조선병독표체재체,위진일보연구Z2A적공능제공료실험기출.
