四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2007年
4期
573-577
,共5页
赵可佳%程浩%徐妍%朱可建%陈民利%张行%宋韬%王琦%陈大方
趙可佳%程浩%徐妍%硃可建%陳民利%張行%宋韜%王琦%陳大方
조가가%정호%서연%주가건%진민리%장행%송도%왕기%진대방
DNA疫苗%人乳头瘤病毒6E7%钙网蛋白180%免疫反应
DNA疫苗%人乳頭瘤病毒6E7%鈣網蛋白180%免疫反應
DNA역묘%인유두류병독6E7%개망단백180%면역반응
目的 构建融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7,并评价其体外实验和动物模型上的免疫学特性,尤其是抗病毒致病基因的特异性细胞免疫反应.方法 分别构建DNA重组体pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7.将pcDNA3.1-HPV6E7质粒经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性细胞集落,荧光显微镜观察和RT-PCR鉴定表达HPV6E7的阳性细胞株.将质粒DNA肌注免疫C57BL/6小鼠,3次后取全血经流式细胞仪检测T细胞亚群的变化,LDH法检测小鼠的脾细胞和淋巴细胞与靶细胞B16/HPV6E7孵育后的CTL活性以及ELISA法检测共孵育上清中IL-2和IFN-γ浓度的变化.结果 各组质粒经鉴定表明构建正确.转染后细胞株稳定表达HPV6E7.DNA疫苗免疫小鼠后,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7免疫组较pcDNA3.1-HPV6E7免疫组的外周血CD8+T细胞和TCRγδT细胞的比例显著增加,脾细胞和淋巴细胞针对靶细胞B16/HPV6E7的CTL杀伤活性更明显,分泌IL-2和IFN-γ的水平升高(P＜0.05).结论 CRT180与HPV致病基因6E7相连的重组质粒疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7能引发小鼠T细胞亚群CD8+分化并诱导出显著的特异性CTL反应.推测CRT180/HPV6E7 DNA疫苗在动物模型上可以有效激活抗HPV特异性细胞免疫,有利于病毒感染的清除.
目的 構建融閤DNA疫苗CRT180/HPV6E7,併評價其體外實驗和動物模型上的免疫學特性,尤其是抗病毒緻病基因的特異性細胞免疫反應.方法 分彆構建DNA重組體pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7.將pcDNA3.1-HPV6E7質粒經脂質體介導轉染B16細胞,以G418篩選暘性細胞集落,熒光顯微鏡觀察和RT-PCR鑒定錶達HPV6E7的暘性細胞株.將質粒DNA肌註免疫C57BL/6小鼠,3次後取全血經流式細胞儀檢測T細胞亞群的變化,LDH法檢測小鼠的脾細胞和淋巴細胞與靶細胞B16/HPV6E7孵育後的CTL活性以及ELISA法檢測共孵育上清中IL-2和IFN-γ濃度的變化.結果 各組質粒經鑒定錶明構建正確.轉染後細胞株穩定錶達HPV6E7.DNA疫苗免疫小鼠後,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7免疫組較pcDNA3.1-HPV6E7免疫組的外週血CD8+T細胞和TCRγδT細胞的比例顯著增加,脾細胞和淋巴細胞針對靶細胞B16/HPV6E7的CTL殺傷活性更明顯,分泌IL-2和IFN-γ的水平升高(P＜0.05).結論 CRT180與HPV緻病基因6E7相連的重組質粒疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7能引髮小鼠T細胞亞群CD8+分化併誘導齣顯著的特異性CTL反應.推測CRT180/HPV6E7 DNA疫苗在動物模型上可以有效激活抗HPV特異性細胞免疫,有利于病毒感染的清除.
목적 구건융합DNA역묘CRT180/HPV6E7,병평개기체외실험화동물모형상적면역학특성,우기시항병독치병기인적특이성세포면역반응.방법 분별구건DNA중조체pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7.장pcDNA3.1-HPV6E7질립경지질체개도전염B16세포,이G418사선양성세포집락,형광현미경관찰화RT-PCR감정표체HPV6E7적양성세포주.장질립DNA기주면역C57BL/6소서,3차후취전혈경류식세포의검측T세포아군적변화,LDH법검측소서적비세포화림파세포여파세포B16/HPV6E7부육후적CTL활성이급ELISA법검측공부육상청중IL-2화IFN-γ농도적변화.결과 각조질립경감정표명구건정학.전염후세포주은정표체HPV6E7.DNA역묘면역소서후,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7면역조교pcDNA3.1-HPV6E7면역조적외주혈CD8+T세포화TCRγδT세포적비례현저증가,비세포화림파세포침대파세포B16/HPV6E7적CTL살상활성경명현,분비IL-2화IFN-γ적수평승고(P＜0.05).결론 CRT180여HPV치병기인6E7상련적중조질립역묘pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7능인발소서T세포아군CD8+분화병유도출현저적특이성CTL반응.추측CRT180/HPV6E7 DNA역묘재동물모형상가이유효격활항HPV특이성세포면역,유리우병독감염적청제.
