江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
6期
27-31
,共5页
周红梅%陈哲%蔡兆伟%蒋晓玲%徐宁迎%郭晓令
週紅梅%陳哲%蔡兆偉%蔣曉玲%徐寧迎%郭曉令
주홍매%진철%채조위%장효령%서저영%곽효령
fat-1%密码子优化%克隆%家兔%表达载体构建
fat-1%密碼子優化%剋隆%傢兔%錶達載體構建
fat-1%밀마자우화%극륭%가토%표체재체구건
提取秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)总RNA,采用RT-PCR法扩增出fat-1基因cDNA全长.根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的fat-1 cDNA序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1).将扩增的fat-1 cDNA和opfat-1基因分别与pGEM-T Easy和pUC57载体连接,转化大肠杆菌DH5α,获得2种重组克隆子.2种重组子经双酶切后获得的目的片段分别定向克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组表达载体,并对其进行PCR、限制性内切酶酶切分析和测序鉴定,结果表明,成功构建了fat-1基因家兔表达载体pEGFP-opfat-1和pEGFP-fat-1,且读码框正确.
提取秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)總RNA,採用RT-PCR法擴增齣fat-1基因cDNA全長.根據傢兔基因密碼子使用偏好性,對引自GenBank的fat-1 cDNA序列進行密碼子優化,通過全基因閤成的方法穫得優化後的fat-1基因(命名為opfat-1).將擴增的fat-1 cDNA和opfat-1基因分彆與pGEM-T Easy和pUC57載體連接,轉化大腸桿菌DH5α,穫得2種重組剋隆子.2種重組子經雙酶切後穫得的目的片段分彆定嚮剋隆入綠色熒光蛋白真覈錶達載體pEGFP-C1中,構建重組錶達載體,併對其進行PCR、限製性內切酶酶切分析和測序鑒定,結果錶明,成功構建瞭fat-1基因傢兔錶達載體pEGFP-opfat-1和pEGFP-fat-1,且讀碼框正確.
제취수려은간선충(Caenorhabditis elegans)총RNA,채용RT-PCR법확증출fat-1기인cDNA전장.근거가토기인밀마자사용편호성,대인자GenBank적fat-1 cDNA서렬진행밀마자우화,통과전기인합성적방법획득우화후적fat-1기인(명명위opfat-1).장확증적fat-1 cDNA화opfat-1기인분별여pGEM-T Easy화pUC57재체련접,전화대장간균DH5α,획득2충중조극륭자.2충중조자경쌍매절후획득적목적편단분별정향극륭입록색형광단백진핵표체재체pEGFP-C1중,구건중조표체재체,병대기진행PCR、한제성내절매매절분석화측서감정,결과표명,성공구건료fat-1기인가토표체재체pEGFP-opfat-1화pEGFP-fat-1,차독마광정학.
