山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
48期
19-21
,共3页
王长青%尹永硕%李雷%谢玉波%肖强
王長青%尹永碩%李雷%謝玉波%肖彊
왕장청%윤영석%리뢰%사옥파%초강
E2F-1%胃肿瘤%MGC-803细胞%转染
E2F-1%胃腫瘤%MGC-803細胞%轉染
E2F-1%위종류%MGC-803세포%전염
目的 通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶 EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.结果 重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致.获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.结论 成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础.
目的 通過構建含E2F-1基因的真覈錶達載體,轉染胃癌細胞MGC-803,穫得Genectin抗性的穩定過錶達E2F-1的胃癌細胞株.方法 PCR擴增E2F-1基因片段,經限製性內切酶 EcoRⅠ和Hind Ⅲ雙酶切後將E2F-1定嚮剋隆到真覈錶達載體pCMV-HA2中轉化篩選.用脂質體Lipofectamine 2000將該載體轉染MGC-803胃癌細胞,然後用含G418的培養基篩選穫得具Genectin抗性的過錶達E2F-1的胃癌細胞株.RT-PCR和Western blot技術檢測MGC-803/E2F-1細胞內E2F-1錶達情況.結果 重組載體pCMV-E2F-1-HA2經EcoRⅠ和Hind Ⅲ雙酶切後得到預期片段,測序結果與報道的E2F-1基因完全一緻.穫取具Genectin抗性的細胞剋隆,併進行瞭擴增.RT-PCR和Western blot證實重組載體pCMV-E2F-1-HA2成功轉入胃癌細胞內,併穩定過錶達E2F-1.結論 成功穫取具Genectin抗性的穩定過錶達E2F-1的胃癌細胞株,為下一步的功能實驗奠定瞭基礎.
목적 통과구건함E2F-1기인적진핵표체재체,전염위암세포MGC-803,획득Genectin항성적은정과표체E2F-1적위암세포주.방법 PCR확증E2F-1기인편단,경한제성내절매 EcoRⅠ화Hind Ⅲ쌍매절후장E2F-1정향극륭도진핵표체재체pCMV-HA2중전화사선.용지질체Lipofectamine 2000장해재체전염MGC-803위암세포,연후용함G418적배양기사선획득구Genectin항성적과표체E2F-1적위암세포주.RT-PCR화Western blot기술검측MGC-803/E2F-1세포내E2F-1표체정황.결과 중조재체pCMV-E2F-1-HA2경EcoRⅠ화Hind Ⅲ쌍매절후득도예기편단,측서결과여보도적E2F-1기인완전일치.획취구Genectin항성적세포극륭,병진행료확증.RT-PCR화Western blot증실중조재체pCMV-E2F-1-HA2성공전입위암세포내,병은정과표체E2F-1.결론 성공획취구Genectin항성적은정과표체E2F-1적위암세포주,위하일보적공능실험전정료기출.
