生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2011年
4期
317-322
,共6页
朱雪姣%李育敏%谷景义%郭敏%费嘉
硃雪姣%李育敏%穀景義%郭敏%費嘉
주설교%리육민%곡경의%곽민%비가
miRNA-21%反义寡核苷酸%阿糖胞苷%K562细胞%化疗敏感性
miRNA-21%反義寡覈苷痠%阿糖胞苷%K562細胞%化療敏感性
miRNA-21%반의과핵감산%아당포감%K562세포%화료민감성
为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性及可能的作用机制,在LipofectamineTM 2000介导下,将化学合成的AMO-miR-21转染K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用AMO-miR-21、Ara-C以及两者联合使用对细胞增殖抑制作用,并计算抑制率和IC50；流式细胞仪检测细胞凋亡；实时定量PCR(Real-time PCR)检测miRNA-21及其候选靶基因Pdcd4 mRNA的表达水平；免疫印迹(Western blot)检测Pdcd4蛋白的表达水平.结果显示Ara-C与AMO-miR-21联合使用后,IC50从1.95 μmol/L降低到0.84 μmol/L,敏感性提高到单用Am-C的2.3倍.AMO-miR-21联合Ara-C组细胞凋亡明显增加(P＜0.05).AMO-miR-21显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P＜0.05),同时Pdcd4的表达明显增加(P＜0.05).提示AMO-miR-21可以提高K562细胞对Ara-C的敏感性,其作用机制与靶向抑制miRNA-21,进而诱导细胞凋亡有关.
為研究以miRNA-21為靶標的反義覈痠(AMO-miR-21)提高白血病K562細胞對阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性及可能的作用機製,在LipofectamineTM 2000介導下,將化學閤成的AMO-miR-21轉染K562細胞,四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測單獨使用AMO-miR-21、Ara-C以及兩者聯閤使用對細胞增殖抑製作用,併計算抑製率和IC50；流式細胞儀檢測細胞凋亡；實時定量PCR(Real-time PCR)檢測miRNA-21及其候選靶基因Pdcd4 mRNA的錶達水平；免疫印跡(Western blot)檢測Pdcd4蛋白的錶達水平.結果顯示Ara-C與AMO-miR-21聯閤使用後,IC50從1.95 μmol/L降低到0.84 μmol/L,敏感性提高到單用Am-C的2.3倍.AMO-miR-21聯閤Ara-C組細胞凋亡明顯增加(P＜0.05).AMO-miR-21顯著抑製K562細胞中miRNA-21的錶達水平(P＜0.05),同時Pdcd4的錶達明顯增加(P＜0.05).提示AMO-miR-21可以提高K562細胞對Ara-C的敏感性,其作用機製與靶嚮抑製miRNA-21,進而誘導細胞凋亡有關.
위연구이miRNA-21위파표적반의핵산(AMO-miR-21)제고백혈병K562세포대아당포감(Ara-C)적민감성급가능적작용궤제,재LipofectamineTM 2000개도하,장화학합성적AMO-miR-21전염K562세포,사갑기우담서람(MTT)법검측단독사용AMO-miR-21、Ara-C이급량자연합사용대세포증식억제작용,병계산억제솔화IC50；류식세포의검측세포조망；실시정량PCR(Real-time PCR)검측miRNA-21급기후선파기인Pdcd4 mRNA적표체수평；면역인적(Western blot)검측Pdcd4단백적표체수평.결과현시Ara-C여AMO-miR-21연합사용후,IC50종1.95 μmol/L강저도0.84 μmol/L,민감성제고도단용Am-C적2.3배.AMO-miR-21연합Ara-C조세포조망명현증가(P＜0.05).AMO-miR-21현저억제K562세포중miRNA-21적표체수평(P＜0.05),동시Pdcd4적표체명현증가(P＜0.05).제시AMO-miR-21가이제고K562세포대Ara-C적민감성,기작용궤제여파향억제miRNA-21,진이유도세포조망유관.
