生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
11期
134-139
,共6页
刘中成%时海浪%张艳芬%赵丽君%王培莹%常斌%李雨诗
劉中成%時海浪%張豔芬%趙麗君%王培瑩%常斌%李雨詩
류중성%시해랑%장염분%조려군%왕배형%상빈%리우시
Cg3-Cε4%表达%柱上复性
Cg3-Cε4%錶達%柱上複性
Cg3-Cε4%표체%주상복성
利用RT-PCR技术从变态反应疾病患者外周血淋巴细胞中克隆出人Cε3-Cε4基因,将其克隆至原核表达载体pET-17b中,转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE后Cε3-Cε4蛋白表达量占细菌总蛋白的30.7％.菌体经裂解、2 mol/L尿素洗涤后,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达85.5％.用8 mol/L尿素溶解包涵体,经Ni-NTA柱对变性状态下的目的蛋白进行纯化,并利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,最终目的蛋白纯度为95.3％.Western blotting方法对Cε3-Cε4蛋白进行鉴定,为该蛋白的进一步相关研究奠定基础.
利用RT-PCR技術從變態反應疾病患者外週血淋巴細胞中剋隆齣人Cε3-Cε4基因,將其剋隆至原覈錶達載體pET-17b中,轉化大腸桿菌併進行誘導錶達,SDS-PAGE後Cε3-Cε4蛋白錶達量佔細菌總蛋白的30.7％.菌體經裂解、2 mol/L尿素洗滌後,絕大部分雜蛋白被去除,目的蛋白純度達85.5％.用8 mol/L尿素溶解包涵體,經Ni-NTA柱對變性狀態下的目的蛋白進行純化,併利用降低尿素梯度的方法對純化的蛋白進行複性,最終目的蛋白純度為95.3％.Western blotting方法對Cε3-Cε4蛋白進行鑒定,為該蛋白的進一步相關研究奠定基礎.
이용RT-PCR기술종변태반응질병환자외주혈림파세포중극륭출인Cε3-Cε4기인,장기극륭지원핵표체재체pET-17b중,전화대장간균병진행유도표체,SDS-PAGE후Cε3-Cε4단백표체량점세균총단백적30.7％.균체경렬해、2 mol/L뇨소세조후,절대부분잡단백피거제,목적단백순도체85.5％.용8 mol/L뇨소용해포함체,경Ni-NTA주대변성상태하적목적단백진행순화,병이용강저뇨소제도적방법대순화적단백진행복성,최종목적단백순도위95.3％.Western blotting방법대Cε3-Cε4단백진행감정,위해단백적진일보상관연구전정기출.
