福建农业学报
福建農業學報
복건농업학보
FUJIAN JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
7期
734-738
,共5页
余彦%李程勋%陈树清%叶长亮%黄力坤%许铁城%林文雄
餘彥%李程勛%陳樹清%葉長亮%黃力坤%許鐵城%林文雄
여언%리정훈%진수청%협장량%황력곤%허철성%림문웅
Taq DNA聚合酶%硫酸铵%阴离子交换柱
Taq DNA聚閤酶%硫痠銨%陰離子交換柱
Taq DNA취합매%류산안%음리자교환주
通过37℃恒温振荡培养含有Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株,并用IPTG诱导该基因表达获得TaqDNA聚合酶蛋白,利用40％硫酸铵沉淀该蛋白后溶解于storage buffer中.此法获得的Taq DNA聚合酶带负电荷,因此采用阴离子交换柱纯化蛋白.试验结果表明,此法与传统的透析方法相比能快速地去除生物小分子杂质,同时去除透析方法无法除去的杂蛋白；既能保证Taq DNA聚合酶的生物学活性,同时能缩短纯化时间、提高Taq DNA聚合酶的纯度.以土壤微生物DNA、水稻cDNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行测序,结果显示纯化后的Taq DNA聚合酶具有较高的扩增效率和保真性.
通過37℃恆溫振盪培養含有Taq DNA聚閤酶基因的E.coli菌株,併用IPTG誘導該基因錶達穫得TaqDNA聚閤酶蛋白,利用40％硫痠銨沉澱該蛋白後溶解于storage buffer中.此法穫得的Taq DNA聚閤酶帶負電荷,因此採用陰離子交換柱純化蛋白.試驗結果錶明,此法與傳統的透析方法相比能快速地去除生物小分子雜質,同時去除透析方法無法除去的雜蛋白；既能保證Taq DNA聚閤酶的生物學活性,同時能縮短純化時間、提高Taq DNA聚閤酶的純度.以土壤微生物DNA、水稻cDNA為模闆進行PCR擴增併對擴增產物進行測序,結果顯示純化後的Taq DNA聚閤酶具有較高的擴增效率和保真性.
통과37℃항온진탕배양함유Taq DNA취합매기인적E.coli균주,병용IPTG유도해기인표체획득TaqDNA취합매단백,이용40％류산안침정해단백후용해우storage buffer중.차법획득적Taq DNA취합매대부전하,인차채용음리자교환주순화단백.시험결과표명,차법여전통적투석방법상비능쾌속지거제생물소분자잡질,동시거제투석방법무법제거적잡단백；기능보증Taq DNA취합매적생물학활성,동시능축단순화시간、제고Taq DNA취합매적순도.이토양미생물DNA、수도cDNA위모판진행PCR확증병대확증산물진행측서,결과현시순화후적Taq DNA취합매구유교고적확증효솔화보진성.
