生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
222-225
,共4页
贾向志%林李家宓%何明亮%马文煜%黄培堂%孔祥复%黄翠芬
賈嚮誌%林李傢宓%何明亮%馬文煜%黃培堂%孔祥複%黃翠芬
가향지%림리가복%하명량%마문욱%황배당%공상복%황취분
神经胶质瘤%细胞周期相关激酶%启动子%双荧光素酶分析
神經膠質瘤%細胞週期相關激酶%啟動子%雙熒光素酶分析
신경효질류%세포주기상관격매%계동자%쌍형광소매분석
克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子.通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5′端非翻译区大小为1 072 bp的片段.这段片段的3′端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128 bp处.以1 072 bp为模板,对启动子进行5′端删除分析,分别扩增951 bp(-1072/-128)、564 bp(-692/-128)、313 bp(-441/-128)、127 bp(-239/-128)的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5′端带有KpnI、3′端带有Xhol位点.瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析.对分离出的1072 bp的片段进行测序,结果与GennBank(Accession AF035013)的序列比较,同源序列达到98%.双荧光素酶活性分析564 bp片段有最强的活性,313 bp片段为有活性的最小片段.本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础.
剋隆人的細胞週期相關激酶(CCRK)基因啟動子,分析與其錶達有關的轉錄調控因子.通過巢式PCR方法,從人的基因組總DNA中分離齣CCRK基因5′耑非翻譯區大小為1 072 bp的片段.這段片段的3′耑起始點在第一箇外顯子裏第一箇翻譯密碼子ATG(+1)上遊128 bp處.以1 072 bp為模闆,對啟動子進行5′耑刪除分析,分彆擴增951 bp(-1072/-128)、564 bp(-692/-128)、313 bp(-441/-128)、127 bp(-239/-128)的片段,與pGL3-Basic熒光素酶報告載體重組構建,人工加上剋隆位點,5′耑帶有KpnI、3′耑帶有Xhol位點.瞬時轉染噁性神經膠質瘤細胞株U373,通過雙熒光素酶活性進行分析.對分離齣的1072 bp的片段進行測序,結果與GennBank(Accession AF035013)的序列比較,同源序列達到98%.雙熒光素酶活性分析564 bp片段有最彊的活性,313 bp片段為有活性的最小片段.本研究為進一步研究分析CCRK的覈心啟動子和與其相關的轉錄因子奠定基礎.
극륭인적세포주기상관격매(CCRK)기인계동자,분석여기표체유관적전록조공인자.통과소식PCR방법,종인적기인조총DNA중분리출CCRK기인5′단비번역구대소위1 072 bp적편단.저단편단적3′단기시점재제일개외현자리제일개번역밀마자ATG(+1)상유128 bp처.이1 072 bp위모판,대계동자진행5′단산제분석,분별확증951 bp(-1072/-128)、564 bp(-692/-128)、313 bp(-441/-128)、127 bp(-239/-128)적편단,여pGL3-Basic형광소매보고재체중조구건,인공가상극륭위점,5′단대유KpnI、3′단대유Xhol위점.순시전염악성신경효질류세포주U373,통과쌍형광소매활성진행분석.대분리출적1072 bp적편단진행측서,결과여GennBank(Accession AF035013)적서렬비교,동원서렬체도98%.쌍형광소매활성분석564 bp편단유최강적활성,313 bp편단위유활성적최소편단.본연구위진일보연구분석CCRK적핵심계동자화여기상관적전록인자전정기출.
