细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
3期
340-343
,共4页
宋立强%李妍%戚好文%王吉村
宋立彊%李妍%慼好文%王吉村
송립강%리연%척호문%왕길촌
钙激活氯离子通道%哮喘%气道%杯状细胞
鈣激活氯離子通道%哮喘%氣道%杯狀細胞
개격활록리자통도%효천%기도%배상세포
目的: 克隆并表达小鼠气道杯状细胞的特定钙激活Cl-通道(mCLCA3). 方法: 根据GenBank(No.NM-017474)的信息, 设计针对mCLCA3的3个胞外段基因的引物.以重组质粒pcDNA3.1(-)/mCLCA3为模板, PCR法扩增3个胞外段的基因.将N端和C端胞外段基因分别亚克隆到原核表达载体pRSET-A中, 中间胞外段基因则亚克隆入原核表达载体pGEX-T1中.分别转化大肠杆菌BL21(DE3) 感受态细胞, 使用IPTG诱导表达.结果: 酶切鉴定和序列分析表明, 克隆的mCLCA3的3个胞外段基因序列与GenBank中登录的完全一致.将这些基因亚克隆到相应表达载体, 经IPTG诱导在大肠杆菌中获得表达, 并且表达产物主要以包涵体的形式存在. 结论: 获得了mCLCA3抗原分子胞外段基因及其原核表达产物, 对进一步制备单克隆抗体, 探讨mCLCA3的通道调控机制具有重要意义.
目的: 剋隆併錶達小鼠氣道杯狀細胞的特定鈣激活Cl-通道(mCLCA3). 方法: 根據GenBank(No.NM-017474)的信息, 設計針對mCLCA3的3箇胞外段基因的引物.以重組質粒pcDNA3.1(-)/mCLCA3為模闆, PCR法擴增3箇胞外段的基因.將N耑和C耑胞外段基因分彆亞剋隆到原覈錶達載體pRSET-A中, 中間胞外段基因則亞剋隆入原覈錶達載體pGEX-T1中.分彆轉化大腸桿菌BL21(DE3) 感受態細胞, 使用IPTG誘導錶達.結果: 酶切鑒定和序列分析錶明, 剋隆的mCLCA3的3箇胞外段基因序列與GenBank中登錄的完全一緻.將這些基因亞剋隆到相應錶達載體, 經IPTG誘導在大腸桿菌中穫得錶達, 併且錶達產物主要以包涵體的形式存在. 結論: 穫得瞭mCLCA3抗原分子胞外段基因及其原覈錶達產物, 對進一步製備單剋隆抗體, 探討mCLCA3的通道調控機製具有重要意義.
목적: 극륭병표체소서기도배상세포적특정개격활Cl-통도(mCLCA3). 방법: 근거GenBank(No.NM-017474)적신식, 설계침대mCLCA3적3개포외단기인적인물.이중조질립pcDNA3.1(-)/mCLCA3위모판, PCR법확증3개포외단적기인.장N단화C단포외단기인분별아극륭도원핵표체재체pRSET-A중, 중간포외단기인칙아극륭입원핵표체재체pGEX-T1중.분별전화대장간균BL21(DE3) 감수태세포, 사용IPTG유도표체.결과: 매절감정화서렬분석표명, 극륭적mCLCA3적3개포외단기인서렬여GenBank중등록적완전일치.장저사기인아극륭도상응표체재체, 경IPTG유도재대장간균중획득표체, 병차표체산물주요이포함체적형식존재. 결론: 획득료mCLCA3항원분자포외단기인급기원핵표체산물, 대진일보제비단극륭항체, 탐토mCLCA3적통도조공궤제구유중요의의.
