中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
15期
229-232
,共4页
高朝宝%李晓明%彭明%崔百明
高朝寶%李曉明%彭明%崔百明
고조보%리효명%팽명%최백명
转基因%RNA干扰%Northern杂交%dsRNA%Cathepsin B基因
轉基因%RNA榦擾%Northern雜交%dsRNA%Cathepsin B基因
전기인%RNA간우%Northern잡교%dsRNA%Cathepsin B기인
RNAi机制可以通过dsRNA诱导同源mRNA的降解,从而导致该基因转录后沉默.RNA干扰作用从发现以来就具有了利用转录后基因沉默(PTGS)来进行抗虫的一种潜在可能性.针对dsRNA的这种作用,研究中提取蚜虫RNA,克隆出蚜虫Cathepsin B基因的干扰片段并构建出RNAi载体,转入本氏烟草中,在转基因烟草体内表达dsRNA.成功构建RNAi载体后,通过农杆菌转化和叶盘法将RNAi载体导入烟草中并采用组织培养方法培养出转基因烟草,通过PCR鉴定显示15株生根的转基因烟草中14株显示阳性.提取转基因烟草的RNA进行RT-PCR和Northern表达分析显示转基因烟草植株中dsRNA表达的存在.实验结果说明了在转基因植物体内表达RNAi载体可以产生dsRNA,从而在蚜虫进食植物时达到利用dsRNA抗蚜虫的作用.
RNAi機製可以通過dsRNA誘導同源mRNA的降解,從而導緻該基因轉錄後沉默.RNA榦擾作用從髮現以來就具有瞭利用轉錄後基因沉默(PTGS)來進行抗蟲的一種潛在可能性.針對dsRNA的這種作用,研究中提取蚜蟲RNA,剋隆齣蚜蟲Cathepsin B基因的榦擾片段併構建齣RNAi載體,轉入本氏煙草中,在轉基因煙草體內錶達dsRNA.成功構建RNAi載體後,通過農桿菌轉化和葉盤法將RNAi載體導入煙草中併採用組織培養方法培養齣轉基因煙草,通過PCR鑒定顯示15株生根的轉基因煙草中14株顯示暘性.提取轉基因煙草的RNA進行RT-PCR和Northern錶達分析顯示轉基因煙草植株中dsRNA錶達的存在.實驗結果說明瞭在轉基因植物體內錶達RNAi載體可以產生dsRNA,從而在蚜蟲進食植物時達到利用dsRNA抗蚜蟲的作用.
RNAi궤제가이통과dsRNA유도동원mRNA적강해,종이도치해기인전록후침묵.RNA간우작용종발현이래취구유료이용전록후기인침묵(PTGS)래진행항충적일충잠재가능성.침대dsRNA적저충작용,연구중제취아충RNA,극륭출아충Cathepsin B기인적간우편단병구건출RNAi재체,전입본씨연초중,재전기인연초체내표체dsRNA.성공구건RNAi재체후,통과농간균전화화협반법장RNAi재체도입연초중병채용조직배양방법배양출전기인연초,통과PCR감정현시15주생근적전기인연초중14주현시양성.제취전기인연초적RNA진행RT-PCR화Northern표체분석현시전기인연초식주중dsRNA표체적존재.실험결과설명료재전기인식물체내표체RNAi재체가이산생dsRNA,종이재아충진식식물시체도이용dsRNA항아충적작용.
