广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
20期
3031-3035
,共5页
曾荣%林治平%郭伟韬%胡资兵%林颢
曾榮%林治平%郭偉韜%鬍資兵%林顥
증영%림치평%곽위도%호자병%림호
骨髓间充质干细胞%转导%神经分化%Wnt信号通路%基因芯片
骨髓間充質榦細胞%轉導%神經分化%Wnt信號通路%基因芯片
골수간충질간세포%전도%신경분화%Wnt신호통로%기인심편
目的 通过Wnt信号通路PCR基因芯片观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)转导Wnt-3a并诱导向神经细胞分化后相关基因的表达变化,寻找Wnt信号通路中调控BMSCs神经分化的靶基因.方法 密度梯度离心加差速贴壁法体外分离和纯化BMSCs,原代培养2周后传代.观察细胞形态特征.基于GatewayTM技术构建双表达慢病毒载体,将Wnt-3a转导至BMSCs.设置转导组、未转导组及对照组,其中转导组和对照组转导Wnt-3a,转导组为扩增后的BMSCs-Wnt-3a,对照组取同时期BMSCs-Wnt-3a,未转导组未转导Wnt-3a.诱导转导组和未转导组细胞神经分化,倒置相差显微镜下观察细胞形态.采用基因芯片技术检测Wnt信号通路基因的改变,用RT-PCR来验证相关基因的上调或者下调.结果 找到2 959个基因上调,4 623个基因下调.在Wnt信号通路的89个基因当中,与神经系统发育和分化相关基因有不同的变化.从中挑选了2个基因做RT-PCR验证,结果表明与芯片结果一致.结论 Wnt通路激活后,下游的基因转录,促进神经分化.
目的 通過Wnt信號通路PCR基因芯片觀察骨髓間充質榦細胞(BMSCs)轉導Wnt-3a併誘導嚮神經細胞分化後相關基因的錶達變化,尋找Wnt信號通路中調控BMSCs神經分化的靶基因.方法 密度梯度離心加差速貼壁法體外分離和純化BMSCs,原代培養2週後傳代.觀察細胞形態特徵.基于GatewayTM技術構建雙錶達慢病毒載體,將Wnt-3a轉導至BMSCs.設置轉導組、未轉導組及對照組,其中轉導組和對照組轉導Wnt-3a,轉導組為擴增後的BMSCs-Wnt-3a,對照組取同時期BMSCs-Wnt-3a,未轉導組未轉導Wnt-3a.誘導轉導組和未轉導組細胞神經分化,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態.採用基因芯片技術檢測Wnt信號通路基因的改變,用RT-PCR來驗證相關基因的上調或者下調.結果 找到2 959箇基因上調,4 623箇基因下調.在Wnt信號通路的89箇基因噹中,與神經繫統髮育和分化相關基因有不同的變化.從中挑選瞭2箇基因做RT-PCR驗證,結果錶明與芯片結果一緻.結論 Wnt通路激活後,下遊的基因轉錄,促進神經分化.
목적 통과Wnt신호통로PCR기인심편관찰골수간충질간세포(BMSCs)전도Wnt-3a병유도향신경세포분화후상관기인적표체변화,심조Wnt신호통로중조공BMSCs신경분화적파기인.방법 밀도제도리심가차속첩벽법체외분리화순화BMSCs,원대배양2주후전대.관찰세포형태특정.기우GatewayTM기술구건쌍표체만병독재체,장Wnt-3a전도지BMSCs.설치전도조、미전도조급대조조,기중전도조화대조조전도Wnt-3a,전도조위확증후적BMSCs-Wnt-3a,대조조취동시기BMSCs-Wnt-3a,미전도조미전도Wnt-3a.유도전도조화미전도조세포신경분화,도치상차현미경하관찰세포형태.채용기인심편기술검측Wnt신호통로기인적개변,용RT-PCR래험증상관기인적상조혹자하조.결과 조도2 959개기인상조,4 623개기인하조.재Wnt신호통로적89개기인당중,여신경계통발육화분화상관기인유불동적변화.종중도선료2개기인주RT-PCR험증,결과표명여심편결과일치.결론 Wnt통로격활후,하유적기인전록,촉진신경분화.
