上海免疫学杂志
上海免疫學雜誌
상해면역학잡지
SHANGHAI JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2002年
2期
86-90
,共5页
时宏珍%戚春建%朱一蓓%席泓%古涛%时文彪%张学光
時宏珍%慼春建%硃一蓓%席泓%古濤%時文彪%張學光
시굉진%척춘건%주일배%석홍%고도%시문표%장학광
CD40%CD40配体%树突状细胞%免疫应答
CD40%CD40配體%樹突狀細胞%免疫應答
CD40%CD40배체%수돌상세포%면역응답
用Ficoll密度离心及贴壁法获得外周血单个核细胞(PBMC),PBMC经细胞因子组合诱导分化成树突状细胞(DC):GM-CSF(100 ng/ml)与IL-4(50 ng/ml)诱导5 d后,分别加入TNF-α(10 ng/ml)或rhsCD40L(2 μg/ml)继续培养4 d;倒置显微镜下观察DC形态,免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型(CD1a、CD80、CD83、HLA-DR、CD14、CD16、CD19)及摄取FITC-Dextran抗原的能力;3H-TdR掺入法检测DC刺激自体混合淋巴细胞体外增殖反应(MLR)能力;ELISA法分析DC培养上清中IL-12的水平;Trans-well细胞趋化实验检测DC对自体外周T淋巴细胞的趋化能力.发现经rhsCD40L刺激的DC表面分子(CD1a、CDS0、CD83、HLA-DR)的表达水平高于经典的细胞因子组合组(GM-CSF+IL-4+TNF-α),同时rhsCD40L刺激后的DC摄取FITC-Dextran的能力下降而刺激自体MLR和分泌IL-12的能力明显提高;而且rhsCD40L诱导的DC表面趋化因子受体CXCR4的表达水平及对自体外周T淋巴细胞的趋化能力均强于TNF-α或FL激发的DC.rhsCD40L在体外不仅具有显著的诱导DC分化,促进DC成熟的功能,而且经rhsCD40L作用的DC能更有效地激发T淋巴细胞.
用Ficoll密度離心及貼壁法穫得外週血單箇覈細胞(PBMC),PBMC經細胞因子組閤誘導分化成樹突狀細胞(DC):GM-CSF(100 ng/ml)與IL-4(50 ng/ml)誘導5 d後,分彆加入TNF-α(10 ng/ml)或rhsCD40L(2 μg/ml)繼續培養4 d;倒置顯微鏡下觀察DC形態,免疫熒光標記和流式細胞術分析DC錶型(CD1a、CD80、CD83、HLA-DR、CD14、CD16、CD19)及攝取FITC-Dextran抗原的能力;3H-TdR摻入法檢測DC刺激自體混閤淋巴細胞體外增殖反應(MLR)能力;ELISA法分析DC培養上清中IL-12的水平;Trans-well細胞趨化實驗檢測DC對自體外週T淋巴細胞的趨化能力.髮現經rhsCD40L刺激的DC錶麵分子(CD1a、CDS0、CD83、HLA-DR)的錶達水平高于經典的細胞因子組閤組(GM-CSF+IL-4+TNF-α),同時rhsCD40L刺激後的DC攝取FITC-Dextran的能力下降而刺激自體MLR和分泌IL-12的能力明顯提高;而且rhsCD40L誘導的DC錶麵趨化因子受體CXCR4的錶達水平及對自體外週T淋巴細胞的趨化能力均彊于TNF-α或FL激髮的DC.rhsCD40L在體外不僅具有顯著的誘導DC分化,促進DC成熟的功能,而且經rhsCD40L作用的DC能更有效地激髮T淋巴細胞.
용Ficoll밀도리심급첩벽법획득외주혈단개핵세포(PBMC),PBMC경세포인자조합유도분화성수돌상세포(DC):GM-CSF(100 ng/ml)여IL-4(50 ng/ml)유도5 d후,분별가입TNF-α(10 ng/ml)혹rhsCD40L(2 μg/ml)계속배양4 d;도치현미경하관찰DC형태,면역형광표기화류식세포술분석DC표형(CD1a、CD80、CD83、HLA-DR、CD14、CD16、CD19)급섭취FITC-Dextran항원적능력;3H-TdR참입법검측DC자격자체혼합림파세포체외증식반응(MLR)능력;ELISA법분석DC배양상청중IL-12적수평;Trans-well세포추화실험검측DC대자체외주T림파세포적추화능력.발현경rhsCD40L자격적DC표면분자(CD1a、CDS0、CD83、HLA-DR)적표체수평고우경전적세포인자조합조(GM-CSF+IL-4+TNF-α),동시rhsCD40L자격후적DC섭취FITC-Dextran적능력하강이자격자체MLR화분비IL-12적능력명현제고;이차rhsCD40L유도적DC표면추화인자수체CXCR4적표체수평급대자체외주T림파세포적추화능력균강우TNF-α혹FL격발적DC.rhsCD40L재체외불부구유현저적유도DC분화,촉진DC성숙적공능,이차경rhsCD40L작용적DC능경유효지격발T림파세포.
