中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
77-82
,共6页
黄运茂%岳光芳%刘丽%刘颖%李万利%施振旦
黃運茂%嶽光芳%劉麗%劉穎%李萬利%施振旦
황운무%악광방%류려%류영%리만리%시진단
质粒%串联多聚体%抗体%制备%应用
質粒%串聯多聚體%抗體%製備%應用
질립%천련다취체%항체%제비%응용
质粒pRSET-A是一个常用的高效原核表达载体,编码一N端含组氨酸标签(6×His)的34aa前导肽序列,以方便利用抗组氨酸标签抗体鉴定或纯化所表达的重组蛋白.实验设计一对两侧含编码疏水性氨基酸密码子的引物,经过扩增前导序列10~34aa基因序列,并重新克隆入质粒pRSET-A构建串联二聚体后,再利用质粒pRSET-A的BamH I / Bgl II同尾酶克隆位点,经一系列简单的酶切和连接,快速构建这一前导肽中不含组氨酸标签序列的串联多聚体基因,并成功表达其六聚体重组蛋白.将此重组蛋白主动免疫山羊,获得了能够特异地识别pRSET-A编码的N端前导肽序列的抗体.结果显示,所制备的羊抗10~34aa前导肽抗体能够识别pRSET-A指导表达的含有完整前导肽的重组蛋白,但不能识别不含10~34aa序列的重组蛋白;同时,利用同位酶技术可以快速高效构建短肽的串联多聚体以制备具有高免疫原性的亚单位疫苗或免疫调控物质.
質粒pRSET-A是一箇常用的高效原覈錶達載體,編碼一N耑含組氨痠標籤(6×His)的34aa前導肽序列,以方便利用抗組氨痠標籤抗體鑒定或純化所錶達的重組蛋白.實驗設計一對兩側含編碼疏水性氨基痠密碼子的引物,經過擴增前導序列10~34aa基因序列,併重新剋隆入質粒pRSET-A構建串聯二聚體後,再利用質粒pRSET-A的BamH I / Bgl II同尾酶剋隆位點,經一繫列簡單的酶切和連接,快速構建這一前導肽中不含組氨痠標籤序列的串聯多聚體基因,併成功錶達其六聚體重組蛋白.將此重組蛋白主動免疫山羊,穫得瞭能夠特異地識彆pRSET-A編碼的N耑前導肽序列的抗體.結果顯示,所製備的羊抗10~34aa前導肽抗體能夠識彆pRSET-A指導錶達的含有完整前導肽的重組蛋白,但不能識彆不含10~34aa序列的重組蛋白;同時,利用同位酶技術可以快速高效構建短肽的串聯多聚體以製備具有高免疫原性的亞單位疫苗或免疫調控物質.
질립pRSET-A시일개상용적고효원핵표체재체,편마일N단함조안산표첨(6×His)적34aa전도태서렬,이방편이용항조안산표첨항체감정혹순화소표체적중조단백.실험설계일대량측함편마소수성안기산밀마자적인물,경과확증전도서렬10~34aa기인서렬,병중신극륭입질립pRSET-A구건천련이취체후,재이용질립pRSET-A적BamH I / Bgl II동미매극륭위점,경일계렬간단적매절화련접,쾌속구건저일전도태중불함조안산표첨서렬적천련다취체기인,병성공표체기륙취체중조단백.장차중조단백주동면역산양,획득료능구특이지식별pRSET-A편마적N단전도태서렬적항체.결과현시,소제비적양항10~34aa전도태항체능구식별pRSET-A지도표체적함유완정전도태적중조단백,단불능식별불함10~34aa서렬적중조단백;동시,이용동위매기술가이쾌속고효구건단태적천련다취체이제비구유고면역원성적아단위역묘혹면역조공물질.
