中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2009年
8期
631-636
,共6页
何延华%景志忠%陈国华%房永祥%蒙学莲%李小庆%段风云%王生富
何延華%景誌忠%陳國華%房永祥%矇學蓮%李小慶%段風雲%王生富
하연화%경지충%진국화%방영상%몽학련%리소경%단풍운%왕생부
外周血单个核细胞(PBMC)%诱导刺激%抑制消减杂交,cDNA文库
外週血單箇覈細胞(PBMC)%誘導刺激%抑製消減雜交,cDNA文庫
외주혈단개핵세포(PBMC)%유도자격%억제소감잡교,cDNA문고
为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析.从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200 bp～1 000 bp之间.随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率.结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量.本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因.
為篩選牦牛外週血單覈細胞(PBMC)差異性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)聯閤刺激的PBMC cDNA為實驗組,未經誘導刺激的PBMC cDNA為驅動組,利用抑製性消減雜交技術(SSH)構建瞭絲裂原誘導刺激PBMC的消減文庫併對其部分暘性剋隆進行瞭EST序列分析.從消減文庫中隨機挑取16箇暘性剋隆,進行PCR鑒定,顯示剋隆的重組率大于93%,插入片段大小大部分集中在200 bp～1 000 bp之間.隨機挑取100箇剋隆進行測序及同源性分析,初步穫得27條差異錶達基因片段,其中24箇為已知基因,3箇為新ESTs序列;隨機選擇非重複的6箇差異錶達的序列設計引物,以半定量PCR方法驗證其消減效率.結果顯示,均從構建的消減文庫中擴增到目的片段,其中5箇為誘導性差異錶達分子,1箇為誘導特異性錶達分子,說明該文庫有較高的質量.本研究應用抑製消減雜交技術構建瞭牦牛PBMC的差異錶達cDNA文庫,併高通量剋隆鑒定瞭相關功能基因片段,錶明該技術手段有助于快速髮現牦牛新功能基因.
위사선모우외주혈단핵세포(PBMC)차이성기인,이도두소A(ConA)화지다당(LPS)연합자격적PBMC cDNA위실험조,미경유도자격적PBMC cDNA위구동조,이용억제성소감잡교기술(SSH)구건료사렬원유도자격PBMC적소감문고병대기부분양성극륭진행료EST서렬분석.종소감문고중수궤도취16개양성극륭,진행PCR감정,현시극륭적중조솔대우93%,삽입편단대소대부분집중재200 bp～1 000 bp지간.수궤도취100개극륭진행측서급동원성분석,초보획득27조차이표체기인편단,기중24개위이지기인,3개위신ESTs서렬;수궤선택비중복적6개차이표체적서렬설계인물,이반정량PCR방법험증기소감효솔.결과현시,균종구건적소감문고중확증도목적편단,기중5개위유도성차이표체분자,1개위유도특이성표체분자,설명해문고유교고적질량.본연구응용억제소감잡교기술구건료모우PBMC적차이표체cDNA문고,병고통량극륭감정료상관공능기인편단,표명해기술수단유조우쾌속발현모우신공능기인.
