广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
12期
1514-1516
,共3页
萧平难%徐兵%宋小燕%陈国枢%史鹏程%张妍琰%周淑芸
蕭平難%徐兵%宋小燕%陳國樞%史鵬程%張妍琰%週淑蕓
소평난%서병%송소연%진국추%사붕정%장연염%주숙예
BAALC%TA克隆%双酶切%逆转录病毒载体
BAALC%TA剋隆%雙酶切%逆轉錄病毒載體
BAALC%TA극륭%쌍매절%역전록병독재체
目的 构建含BAALC(brain and acute leukemia, cytoplasmic)1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体.方法 从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC 1-6-8获得目的 基因,选用pMDTM18-T Vector做TA克隆.分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNATM3.1/myc-His A+质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中.PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定.结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535 bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664 bp,双酶切及测序结果证实目的 基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中.结论 分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体.
目的 構建含BAALC(brain and acute leukemia, cytoplasmic)1-6-8轉錄本的逆轉錄病毒錶達載體.方法 從KASUMI-1細胞株中提取mRNA,應用RT-PCR技術擴增BAALC 1-6-8穫得目的 基因,選用pMDTM18-T Vector做TA剋隆.分彆雙酶切TA剋隆穫得的暘性質粒和pcDNATM3.1/myc-His A+質粒,瓊脂糖電泳純化迴收前者的小片段和後者的大片段,應用T4連接酶連接後轉化至E.coli DH5α中.PCR擴增BAALC-myc-His基因序列,雙酶切PCR產物和pLXSN載體,T4連接酶連接後轉化至E.coli DH5α中,挑選暘性剋隆,PCR、雙酶切及測序鑒定.結果 PCR分彆擴增TA剋隆產物和重組pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535 bp處均可見一清晰的特異性擴增條帶,顯示TA剋隆及重組真覈錶達載體成功;PCR擴增pLXSN-BAALC-His大小為664 bp,雙酶切及測序結果證實目的 基因片段正確插入到逆轉錄病毒錶達載體pLXSN中.結論 分離得到瞭BAALC 1-6-8轉錄本基因,併成功構建瞭pLXSN-BAALC-His錶達載體.
목적 구건함BAALC(brain and acute leukemia, cytoplasmic)1-6-8전록본적역전록병독표체재체.방법 종KASUMI-1세포주중제취mRNA,응용RT-PCR기술확증BAALC 1-6-8획득목적 기인,선용pMDTM18-T Vector주TA극륭.분별쌍매절TA극륭획득적양성질립화pcDNATM3.1/myc-His A+질립,경지당전영순화회수전자적소편단화후자적대편단,응용T4련접매련접후전화지E.coli DH5α중.PCR확증BAALC-myc-His기인서렬,쌍매절PCR산물화pLXSN재체,T4련접매련접후전화지E.coli DH5α중,도선양성극륭,PCR、쌍매절급측서감정.결과 PCR분별확증TA극륭산물화중조pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,재535 bp처균가견일청석적특이성확증조대,현시TA극륭급중조진핵표체재체성공;PCR확증pLXSN-BAALC-His대소위664 bp,쌍매절급측서결과증실목적 기인편단정학삽입도역전록병독표체재체pLXSN중.결론 분리득도료BAALC 1-6-8전록본기인,병성공구건료pLXSN-BAALC-His표체재체.
