浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2010年
4期
408-413
,共6页
汤江武%王新%姚晓红%吴逸飞%许尧兴%柳永
湯江武%王新%姚曉紅%吳逸飛%許堯興%柳永
탕강무%왕신%요효홍%오일비%허요흥%류영
棉粕%微生物发酵%DNA提取%PCR-DGGE
棉粕%微生物髮酵%DNA提取%PCR-DGGE
면박%미생물발효%DNA제취%PCR-DGGE
棉粕是我国重要的饲用蛋白质原料,采用微生物发酵原棉粕脱毒是当前重要的高效技术手段.为了使用分子生态学方法监测微生物发酵棉粕的过程,优化发酵工艺,试验先以脱色缓冲液去除棉粕发酵样品中的游离棉酚及色素类杂质,继之以溶菌酶-SDS-蛋白酶K温和裂解,提取获得总DNA产量达1.8～6.4 μg/g棉粕样品(湿),DNA的提取效率达89%以上,片段大小均在23 kb左右,不经纯化即可直接进行PCR扩增和限制性酶切.以该DNA为模板扩增16S rRNA V3区片段,可用DGGE分析棉粕发酵过程中细菌群落结构的变化.该方法是一种适用于棉粕发酵样品总DNA提取的简便、可靠方法.
棉粕是我國重要的飼用蛋白質原料,採用微生物髮酵原棉粕脫毒是噹前重要的高效技術手段.為瞭使用分子生態學方法鑑測微生物髮酵棉粕的過程,優化髮酵工藝,試驗先以脫色緩遲液去除棉粕髮酵樣品中的遊離棉酚及色素類雜質,繼之以溶菌酶-SDS-蛋白酶K溫和裂解,提取穫得總DNA產量達1.8～6.4 μg/g棉粕樣品(濕),DNA的提取效率達89%以上,片段大小均在23 kb左右,不經純化即可直接進行PCR擴增和限製性酶切.以該DNA為模闆擴增16S rRNA V3區片段,可用DGGE分析棉粕髮酵過程中細菌群落結構的變化.該方法是一種適用于棉粕髮酵樣品總DNA提取的簡便、可靠方法.
면박시아국중요적사용단백질원료,채용미생물발효원면박탈독시당전중요적고효기술수단.위료사용분자생태학방법감측미생물발효면박적과정,우화발효공예,시험선이탈색완충액거제면박발효양품중적유리면분급색소류잡질,계지이용균매-SDS-단백매K온화렬해,제취획득총DNA산량체1.8～6.4 μg/g면박양품(습),DNA적제취효솔체89%이상,편단대소균재23 kb좌우,불경순화즉가직접진행PCR확증화한제성매절.이해DNA위모판확증16S rRNA V3구편단,가용DGGE분석면박발효과정중세균군락결구적변화.해방법시일충괄용우면박발효양품총DNA제취적간편、가고방법.
