江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
2期
80-83
,共4页
祁彩虹%金则新%李钧敏%彭礼琼%王强
祁綵虹%金則新%李鈞敏%彭禮瓊%王彊
기채홍%금칙신%리균민%팽례경%왕강
野芝麻%ISSR分子标记%优化%引物筛选
野芝痳%ISSR分子標記%優化%引物篩選
야지마%ISSR분자표기%우화%인물사선
以野芝麻(Lamium barbatum)DNA为模板,利用单因子试验分别对影响野芝麻ISSR-PCR反应的Mg(2+)浓度、BSA(小牛血清蛋白)、DNA、Taq DNA聚合酶、4 ×dNTP和引物的浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定试验的退火温度,最终确定野芝麻最佳的反应体系及PCR扩增程序为:10μL体系,其中包括1×Buffer、Mg(2+),2.5 mmol/L、BSA10 mg/mL、模板DNA15 ng、Taq DNA聚合酶1.5U、4×dNTP0.4mmol/L、引物15pmol;扩增程序:94℃变性5 min;94℃变性30 s,55.2℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃再延伸5 min反应终止.利用优化后的反应条件筛选出10个ISSR引物,并对野芝麻居群进行了遗传多样性分析,多态位点百分率为82.08%,Nei指数为0.1717,Shannon信息指数为0.2381,说明野芝麻遗传多样性水平较高.该体系建立了标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好的扩增条件.
以野芝痳(Lamium barbatum)DNA為模闆,利用單因子試驗分彆對影響野芝痳ISSR-PCR反應的Mg(2+)濃度、BSA(小牛血清蛋白)、DNA、Taq DNA聚閤酶、4 ×dNTP和引物的濃度進行瞭優化,併通過梯度PCR確定試驗的退火溫度,最終確定野芝痳最佳的反應體繫及PCR擴增程序為:10μL體繫,其中包括1×Buffer、Mg(2+),2.5 mmol/L、BSA10 mg/mL、模闆DNA15 ng、Taq DNA聚閤酶1.5U、4×dNTP0.4mmol/L、引物15pmol;擴增程序:94℃變性5 min;94℃變性30 s,55.2℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35箇循環;72℃再延伸5 min反應終止.利用優化後的反應條件篩選齣10箇ISSR引物,併對野芝痳居群進行瞭遺傳多樣性分析,多態位點百分率為82.08%,Nei指數為0.1717,Shannon信息指數為0.2381,說明野芝痳遺傳多樣性水平較高.該體繫建立瞭標記位點清晰、反應繫統穩定、檢測多態性能力彊、重複性好的擴增條件.
이야지마(Lamium barbatum)DNA위모판,이용단인자시험분별대영향야지마ISSR-PCR반응적Mg(2+)농도、BSA(소우혈청단백)、DNA、Taq DNA취합매、4 ×dNTP화인물적농도진행료우화,병통과제도PCR학정시험적퇴화온도,최종학정야지마최가적반응체계급PCR확증정서위:10μL체계,기중포괄1×Buffer、Mg(2+),2.5 mmol/L、BSA10 mg/mL、모판DNA15 ng、Taq DNA취합매1.5U、4×dNTP0.4mmol/L、인물15pmol;확증정서:94℃변성5 min;94℃변성30 s,55.2℃퇴화45 s,72℃연신1.5 min,공35개순배;72℃재연신5 min반응종지.이용우화후적반응조건사선출10개ISSR인물,병대야지마거군진행료유전다양성분석,다태위점백분솔위82.08%,Nei지수위0.1717,Shannon신식지수위0.2381,설명야지마유전다양성수평교고.해체계건립료표기위점청석、반응계통은정、검측다태성능력강、중복성호적확증조건.
