云南农业大学学报
雲南農業大學學報
운남농업대학학보
JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
5期
677-681
,共5页
涡虫%DjStag%RNA干扰%再生
渦蟲%DjStag%RNA榦擾%再生
와충%DjStag%RNA간우%재생
构建DjStag基因的RNA干扰表达载体,诱导表达产生dsRNA后喂食涡虫,观察DjStag表达变化及对涡虫再生的影响.本文以含有东亚三角涡虫DjStag基因的pcDNA3-DjStag重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到干扰载体L4440上,构建重组质粒L4440-DjStag后转化入大肠杆菌HT115感受态细胞中,IPTG诱导表达dsRNA后喂食涡虫.显微观察涡虫再生过程中的表型变化,Real-time PCR检测干扰后涡虫DjStag基因表达的变化.结果表明,成功构建了DjStag基因的RNA干扰表达载体；DjStag基因RNA干扰后,涡虫不能正常再生,再生片段显示出明显的再生缺陷；涡虫体内DjStag基因的表达受到抑制,DjStag mRNA的表达水平显著下降.
構建DjStag基因的RNA榦擾錶達載體,誘導錶達產生dsRNA後餵食渦蟲,觀察DjStag錶達變化及對渦蟲再生的影響.本文以含有東亞三角渦蟲DjStag基因的pcDNA3-DjStag重組質粒為模闆,經PCR擴增目的片段,將其剋隆到榦擾載體L4440上,構建重組質粒L4440-DjStag後轉化入大腸桿菌HT115感受態細胞中,IPTG誘導錶達dsRNA後餵食渦蟲.顯微觀察渦蟲再生過程中的錶型變化,Real-time PCR檢測榦擾後渦蟲DjStag基因錶達的變化.結果錶明,成功構建瞭DjStag基因的RNA榦擾錶達載體；DjStag基因RNA榦擾後,渦蟲不能正常再生,再生片段顯示齣明顯的再生缺陷；渦蟲體內DjStag基因的錶達受到抑製,DjStag mRNA的錶達水平顯著下降.
구건DjStag기인적RNA간우표체재체,유도표체산생dsRNA후위식와충,관찰DjStag표체변화급대와충재생적영향.본문이함유동아삼각와충DjStag기인적pcDNA3-DjStag중조질립위모판,경PCR확증목적편단,장기극륭도간우재체L4440상,구건중조질립L4440-DjStag후전화입대장간균HT115감수태세포중,IPTG유도표체dsRNA후위식와충.현미관찰와충재생과정중적표형변화,Real-time PCR검측간우후와충DjStag기인표체적변화.결과표명,성공구건료DjStag기인적RNA간우표체재체；DjStag기인RNA간우후,와충불능정상재생,재생편단현시출명현적재생결함；와충체내DjStag기인적표체수도억제,DjStag mRNA적표체수평현저하강.
