复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2002年
6期
646-649
,共4页
翟杰%高卜渝%裴黎霞%吴俊%宋大新
翟傑%高蔔渝%裴黎霞%吳俊%宋大新
적걸%고복투%배려하%오준%송대신
转甲状腺素蛋白基因%分泌型载体%毕赤氏酵母%蛋白质印迹
轉甲狀腺素蛋白基因%分泌型載體%畢赤氏酵母%蛋白質印跡
전갑상선소단백기인%분비형재체%필적씨효모%단백질인적
用限制酶将pSK-TTR质粒上TTR基因切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K. 将重组的pPIC9K-TTR用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转化子经摇瓶发酵,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rTTR表达. 经DEAE-sepharose F. F. 离子交换柱和Superdex75分子筛层析,得到蛋白纯度大于95%的rTTR. 经Western blotting,分子质量和等电点测定等证明,毕赤氏酵母表达的rTTR与人血浆提取的TTR极为相似.
用限製酶將pSK-TTR質粒上TTR基因切下,分彆插入分泌型載體pPIC9和pPIC9K. 將重組的pPIC9K-TTR用BglⅡ酶切後,轉化Pichia pastoris GS115 菌株,篩選穫得G418高抗性轉化子. 轉化子經搖瓶髮酵,上清液用SDS-PAGE檢測,有明顯的rTTR錶達. 經DEAE-sepharose F. F. 離子交換柱和Superdex75分子篩層析,得到蛋白純度大于95%的rTTR. 經Western blotting,分子質量和等電點測定等證明,畢赤氏酵母錶達的rTTR與人血漿提取的TTR極為相似.
용한제매장pSK-TTR질립상TTR기인절하,분별삽입분비형재체pPIC9화pPIC9K. 장중조적pPIC9K-TTR용BglⅡ매절후,전화Pichia pastoris GS115 균주,사선획득G418고항성전화자. 전화자경요병발효,상청액용SDS-PAGE검측,유명현적rTTR표체. 경DEAE-sepharose F. F. 리자교환주화Superdex75분자사층석,득도단백순도대우95%적rTTR. 경Western blotting,분자질량화등전점측정등증명,필적씨효모표체적rTTR여인혈장제취적TTR겁위상사.
