细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
4期
449-451,455
,共4页
赵爱志%彭建强%曹晖%康禹%崔莲仙%吴小兵%何维
趙愛誌%彭建彊%曹暉%康禹%崔蓮仙%吳小兵%何維
조애지%팽건강%조휘%강우%최련선%오소병%하유
冠状病毒%单链抗体库%细胞内重组
冠狀病毒%單鏈抗體庫%細胞內重組
관상병독%단련항체고%세포내중조
目的:利用细胞内重组的方法, 构建大库容量的人源性抗SARS病毒单链抗体(scFv)库, 为筛选SARS病毒抗原的人源性抗体奠定基础.方法: 取6例SARS康复患者的80 mL 外周血, 分离淋巴细胞后提取总RNA.分离纯化mRNA 并反转录成cDNA后, 扩增抗体重链、轻链可变区基因片段.然后经重叠延伸PCR装配成scFv基因并克隆入噬粒载体pDAN5中, 电转化大肠杆菌TG1构建初级抗体库.制备初级库噬菌体后, 感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组制备次级抗体库.结果: 初级库库容量为3×109, 在大肠杆菌BS1365中重组后得到3×1011的次级抗体库.结论: 细胞内重组方法的应用可使大库容量抗体库的构建变得简单易行.构建的抗SARS病毒单链抗体次库不仅接近人类天然抗体库的水平, 而且多样性好, 为筛选抗SARS病毒抗原的抗体提供了保证.
目的:利用細胞內重組的方法, 構建大庫容量的人源性抗SARS病毒單鏈抗體(scFv)庫, 為篩選SARS病毒抗原的人源性抗體奠定基礎.方法: 取6例SARS康複患者的80 mL 外週血, 分離淋巴細胞後提取總RNA.分離純化mRNA 併反轉錄成cDNA後, 擴增抗體重鏈、輕鏈可變區基因片段.然後經重疊延伸PCR裝配成scFv基因併剋隆入噬粒載體pDAN5中, 電轉化大腸桿菌TG1構建初級抗體庫.製備初級庫噬菌體後, 感染大腸桿菌BS1365進行細胞內重組製備次級抗體庫.結果: 初級庫庫容量為3×109, 在大腸桿菌BS1365中重組後得到3×1011的次級抗體庫.結論: 細胞內重組方法的應用可使大庫容量抗體庫的構建變得簡單易行.構建的抗SARS病毒單鏈抗體次庫不僅接近人類天然抗體庫的水平, 而且多樣性好, 為篩選抗SARS病毒抗原的抗體提供瞭保證.
목적:이용세포내중조적방법, 구건대고용량적인원성항SARS병독단련항체(scFv)고, 위사선SARS병독항원적인원성항체전정기출.방법: 취6례SARS강복환자적80 mL 외주혈, 분리림파세포후제취총RNA.분리순화mRNA 병반전록성cDNA후, 확증항체중련、경련가변구기인편단.연후경중첩연신PCR장배성scFv기인병극륭입서립재체pDAN5중, 전전화대장간균TG1구건초급항체고.제비초급고서균체후, 감염대장간균BS1365진행세포내중조제비차급항체고.결과: 초급고고용량위3×109, 재대장간균BS1365중중조후득도3×1011적차급항체고.결론: 세포내중조방법적응용가사대고용량항체고적구건변득간단역행.구건적항SARS병독단련항체차고불부접근인류천연항체고적수평, 이차다양성호, 위사선항SARS병독항원적항체제공료보증.
