CAJ | 학술논문

目的:用三种不同方法复性重组人骨形成蛋白2成熟肽(rhBMP-2m),比较其异位诱骨活性.方法:将工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,裂菌收集包涵体后经离子交换色谱分离纯化.纯化后的rhBMP-2m用三种不同方法复性:①对pH 4.8复性液透析复性;②对pH 9.0复性液稀释复性;③对pH 6.5复性液透析复性.不加任何载体,1 mg复性后rhBMP-2m直接植入小鼠肌肉观察诱骨生成.结果:得到纯度为98%的rhBMP-2m.①pH 4.8透析复性后蛋白可溶.经过滤除菌,可溶性rhBMP-2m没有损失.冻干后植入肌袋,2 wk后诱导生成软骨,4 wk诱导生成骨小梁.②pH 9.0稀释复性后虽然肉眼观察蛋白似为可溶,但经除菌膜过滤rhBMP-2m损失90%以上.冻干后植入肌袋,1 wk诱导生成软骨,2 wk诱导软骨内成骨,3 wk出现骨小梁.③pH 6.5透析复性后蛋白不可溶,植入肌袋,2 wk诱导生成骨小梁,4 wk后出现骨髓样细胞.结论:相比酸性和碱性条件,中性条件下复性的rhBMP-2m的诱骨活性最好,但酸性条件下复性的rhBMP-2m溶解度好.
목적:용삼충불동방법복성중조인골형성단백2성숙태(rhBMP-2m),비교기이위유골활성.방법:장공정균주진행고밀도발효、온도유도표체,렬균수집포함체후경리자교환색보분리순화.순화후적rhBMP-2m용삼충불동방법복성:①대pH 4.8복성액투석복성;②대pH 9.0복성액희석복성;③대pH 6.5복성액투석복성.불가임하재체,1 mg복성후rhBMP-2m직접식입소서기육관찰유골생성.결과:득도순도위98%적rhBMP-2m.①pH 4.8투석복성후단백가용.경과려제균,가용성rhBMP-2m몰유손실.동간후식입기대,2 wk후유도생성연골,4 wk유도생성골소량.②pH 9.0희석복성후수연육안관찰단백사위가용,단경제균막과려rhBMP-2m손실90%이상.동간후식입기대,1 wk유도생성연골,2 wk유도연골내성골,3 wk출현골소량.③pH 6.5투석복성후단백불가용,식입기대,2 wk유도생성골소량,4 wk후출현골수양세포.결론:상비산성화감성조건,중성조건하복성적rhBMP-2m적유골활성최호,단산성조건하복성적rhBMP-2m용해도호.