中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
5期
515-517,526
,共4页
宋子运%丁壮%徐明%马爱霞%杜眉%常爽%毕玉海%尹仁福
宋子運%丁壯%徐明%馬愛霞%杜眉%常爽%畢玉海%尹仁福
송자운%정장%서명%마애하%두미%상상%필옥해%윤인복
鹅源副黏病毒%反向遗传操作技术%辅助质粒%间接免疫荧光
鵝源副黏病毒%反嚮遺傳操作技術%輔助質粒%間接免疫熒光
아원부점병독%반향유전조작기술%보조질립%간접면역형광
将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA.参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5a,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L.将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达.
將本實驗室保存的NA-1株鵝源副黏病毒(GPMV)經SPF鷄胚增殖,收集尿囊液進行病毒純化,提取病毒基因組RNA.參攷GenBank已收錄的ZJ1株GPMV基因組序列,設計瞭4對特異性引物,利用RT-PCR法分彆特異性的擴增齣病毒NP、P和L基因片段,併將目的基因片段消化、迴收純化,剋隆pCI-neo錶達載體,轉化大腸桿菌DH5a,小提質粒選取暘性剋隆酶切、PCR鑒定併進行序列測定,結果錶明NP、P和L基因正確剋隆到pCI-neo錶達載體中,併分彆命名為pCI-NP、pCI-P和pCI-L.將構建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重組質粒單獨轉染Vero細胞,在熒光顯微鏡下觀察到特異綠色熒光,錶明NP、P和L蛋白得到成功錶達.
장본실험실보존적NA-1주아원부점병독(GPMV)경SPF계배증식,수집뇨낭액진행병독순화,제취병독기인조RNA.삼고GenBank이수록적ZJ1주GPMV기인조서렬,설계료4대특이성인물,이용RT-PCR법분별특이성적확증출병독NP、P화L기인편단,병장목적기인편단소화、회수순화,극륭pCI-neo표체재체,전화대장간균DH5a,소제질립선취양성극륭매절、PCR감정병진행서렬측정,결과표명NP、P화L기인정학극륭도pCI-neo표체재체중,병분별명명위pCI-NP、pCI-P화pCI-L.장구건호적pCI-NP、pCI-P화pCI-L중조질립단독전염Vero세포,재형광현미경하관찰도특이록색형광,표명NP、P화L단백득도성공표체.
