山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2008年
11期
965-968
,共4页
邱龄%肖传实%方雅琴%张圣雪
邱齡%肖傳實%方雅琴%張聖雪
구령%초전실%방아금%장골설
腺病毒%血管再生%低氧诱导因子-1%缺血性疾病
腺病毒%血管再生%低氧誘導因子-1%缺血性疾病
선병독%혈관재생%저양유도인자-1%결혈성질병
目的 利用AdMax腺病毒载体系统构建人重组低氧诱导因子-1α(rhHIF-1α)基因腺病毒并在293细胞中扩增制备重组病毒. 方法 自先期构建的pcDNA4-rhHIF-1α真核表达载体中用RT-PCR法扩增出rhHIF-1α基因片段,将其克隆入线性化的pEGFP1-C1质粒中,用PCR法扩增EGFP-rhHIF-1α基因片段,将其克隆入PUC18质粒中.酶切构建好的pUC18-rhHIF-1α载体并克隆进入穿梭质粒PDC316中,将构建好的穿梭质粒PDC316-rhHIF-1α载体和骨架病毒pBHGlox△1,3Cre共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒.重组的病毒转染SG-7901细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达. 结果 经限制性内切酶检测和GFP表达证实成功地构建了携带重组人HIF-1α基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒. 结论 成功地构建了携带rhHIF-1α基因片段的重组腺病毒载体.
目的 利用AdMax腺病毒載體繫統構建人重組低氧誘導因子-1α(rhHIF-1α)基因腺病毒併在293細胞中擴增製備重組病毒. 方法 自先期構建的pcDNA4-rhHIF-1α真覈錶達載體中用RT-PCR法擴增齣rhHIF-1α基因片段,將其剋隆入線性化的pEGFP1-C1質粒中,用PCR法擴增EGFP-rhHIF-1α基因片段,將其剋隆入PUC18質粒中.酶切構建好的pUC18-rhHIF-1α載體併剋隆進入穿梭質粒PDC316中,將構建好的穿梭質粒PDC316-rhHIF-1α載體和骨架病毒pBHGlox△1,3Cre共轉染293細胞,包裝成重組的病毒顆粒.重組的病毒轉染SG-7901細胞,熒光顯微鏡觀察綠色熒光錶達. 結果 經限製性內切酶檢測和GFP錶達證實成功地構建瞭攜帶重組人HIF-1α基因的重組腺病毒載體併製備齣高滴度重組病毒. 結論 成功地構建瞭攜帶rhHIF-1α基因片段的重組腺病毒載體.
목적 이용AdMax선병독재체계통구건인중조저양유도인자-1α(rhHIF-1α)기인선병독병재293세포중확증제비중조병독. 방법 자선기구건적pcDNA4-rhHIF-1α진핵표체재체중용RT-PCR법확증출rhHIF-1α기인편단,장기극륭입선성화적pEGFP1-C1질립중,용PCR법확증EGFP-rhHIF-1α기인편단,장기극륭입PUC18질립중.매절구건호적pUC18-rhHIF-1α재체병극륭진입천사질립PDC316중,장구건호적천사질립PDC316-rhHIF-1α재체화골가병독pBHGlox△1,3Cre공전염293세포,포장성중조적병독과립.중조적병독전염SG-7901세포,형광현미경관찰록색형광표체. 결과 경한제성내절매검측화GFP표체증실성공지구건료휴대중조인HIF-1α기인적중조선병독재체병제비출고적도중조병독. 결론 성공지구건료휴대rhHIF-1α기인편단적중조선병독재체.
