中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
12-17
,共6页
王丽非%朱元军%王松梅%杜郁%余腾斐%王丽%洪斌
王麗非%硃元軍%王鬆梅%杜鬱%餘騰斐%王麗%洪斌
왕려비%주원군%왕송매%두욱%여등비%왕려%홍빈
干扰素β%重组融合蛋白质类%基因表达
榦擾素β%重組融閤蛋白質類%基因錶達
간우소β%중조융합단백질류%기인표체
目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-16b,重组克隆,经酶切与测序确认后转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达和条件优化.表达产物经Western blotting分析,用Ni sepharose亲和层析纯化,纯化产物进行干扰素生物学活性测定.结果 经表达条件优化后,SDS-PAGE显示重组菌株表达与组氨酸标签人β干扰素分子量大小一致的条带,进一步的Western blotting分析中发现表达的蛋白能与人β干扰素抗体及组氨酸标签抗体产生结合反应,亲和层析纯化分离得到纯度92%的组氨酸标签人β干扰素,干扰素生物学活性测定表明,获得的组氨酸标签人β干扰素比活性为4.2×107U/mg.结论 组氨酸标签人β干扰素编码基因在大肠杆菌中成功表达.建立了该蛋白的简便亲和纯化方法,表达产物具有人β干扰素生物学活性,为进一步以此系统表达及纯化其他具有生物学活性的科研用标签化细胞因子奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中高效錶達組氨痠標籤與人β榦擾素融閤蛋白,併進行蛋白純化和生物活性測定.方法 提取人Bel-7402細胞總DNA為模闆,經PCR穫得人β榦擾素編碼基因片段.將此基因插入錶達載體pET-16b,重組剋隆,經酶切與測序確認後轉化至大腸桿菌BL21(DE3),進行IPTG誘導錶達和條件優化.錶達產物經Western blotting分析,用Ni sepharose親和層析純化,純化產物進行榦擾素生物學活性測定.結果 經錶達條件優化後,SDS-PAGE顯示重組菌株錶達與組氨痠標籤人β榦擾素分子量大小一緻的條帶,進一步的Western blotting分析中髮現錶達的蛋白能與人β榦擾素抗體及組氨痠標籤抗體產生結閤反應,親和層析純化分離得到純度92%的組氨痠標籤人β榦擾素,榦擾素生物學活性測定錶明,穫得的組氨痠標籤人β榦擾素比活性為4.2×107U/mg.結論 組氨痠標籤人β榦擾素編碼基因在大腸桿菌中成功錶達.建立瞭該蛋白的簡便親和純化方法,錶達產物具有人β榦擾素生物學活性,為進一步以此繫統錶達及純化其他具有生物學活性的科研用標籤化細胞因子奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중고효표체조안산표첨여인β간우소융합단백,병진행단백순화화생물활성측정.방법 제취인Bel-7402세포총DNA위모판,경PCR획득인β간우소편마기인편단.장차기인삽입표체재체pET-16b,중조극륭,경매절여측서학인후전화지대장간균BL21(DE3),진행IPTG유도표체화조건우화.표체산물경Western blotting분석,용Ni sepharose친화층석순화,순화산물진행간우소생물학활성측정.결과 경표체조건우화후,SDS-PAGE현시중조균주표체여조안산표첨인β간우소분자량대소일치적조대,진일보적Western blotting분석중발현표체적단백능여인β간우소항체급조안산표첨항체산생결합반응,친화층석순화분리득도순도92%적조안산표첨인β간우소,간우소생물학활성측정표명,획득적조안산표첨인β간우소비활성위4.2×107U/mg.결론 조안산표첨인β간우소편마기인재대장간균중성공표체.건립료해단백적간편친화순화방법,표체산물구유인β간우소생물학활성,위진일보이차계통표체급순화기타구유생물학활성적과연용표첨화세포인자전정료기출.
