广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2010年
5期
57-62
,共6页
王峰%田晶%薛金凤%赵霏%宋柳江%谭孟群
王峰%田晶%薛金鳳%趙霏%宋柳江%譚孟群
왕봉%전정%설금봉%조비%송류강%담맹군
腺相关病毒%动脉粥样硬化%对氧磷酶1%内皮祖细胞
腺相關病毒%動脈粥樣硬化%對氧燐酶1%內皮祖細胞
선상관병독%동맥죽양경화%대양린매1%내피조세포
目的:构建带有人对氧磷酶1(hPON1)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)后hPON1的表达.方法:提取流产胎儿肝脏的总RNA,RT-PCR获得cDNA,设计引物通过PCR获得PON1基因片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,将PON1基因片段切下,插入到质粒pAAV-IRES-GFP的多克隆位点,获得质粒pAAV-PON1-IRES-GFP,经酶切和测序鉴定.包装的病毒rAAV-PON1用斑点杂交检测滴度,并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达.结果:pAAV-PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确.斑点杂交检测病毒的滴度为1.7×1010v.g/mL,RT-PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达.结论:成功构建了pAAV-PON1-IRES-GFP质粒,包装出较高滴度的rAAV-PON1,并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达.
目的:構建帶有人對氧燐酶1(hPON1)基因的重組腺相關病毒(rAAV)載體,併檢測其轉染大鼠骨髓內皮祖細胞(EPCs)後hPON1的錶達.方法:提取流產胎兒肝髒的總RNA,RT-PCR穫得cDNA,設計引物通過PCR穫得PON1基因片段,將其與pGEM-T Easy載體連接,將PON1基因片段切下,插入到質粒pAAV-IRES-GFP的多剋隆位點,穫得質粒pAAV-PON1-IRES-GFP,經酶切和測序鑒定.包裝的病毒rAAV-PON1用斑點雜交檢測滴度,併用其轉染EPCs檢測hPON1在mRNA水平的錶達.結果:pAAV-PON1-IRES-GFP酶切和測序結果完全正確.斑點雜交檢測病毒的滴度為1.7×1010v.g/mL,RT-PCR結果顯示病毒轉染EPCs後存在hPON1的錶達.結論:成功構建瞭pAAV-PON1-IRES-GFP質粒,包裝齣較高滴度的rAAV-PON1,併且轉染EPCs後可以檢測到hPON1錶達.
목적:구건대유인대양린매1(hPON1)기인적중조선상관병독(rAAV)재체,병검측기전염대서골수내피조세포(EPCs)후hPON1적표체.방법:제취유산태인간장적총RNA,RT-PCR획득cDNA,설계인물통과PCR획득PON1기인편단,장기여pGEM-T Easy재체련접,장PON1기인편단절하,삽입도질립pAAV-IRES-GFP적다극륭위점,획득질립pAAV-PON1-IRES-GFP,경매절화측서감정.포장적병독rAAV-PON1용반점잡교검측적도,병용기전염EPCs검측hPON1재mRNA수평적표체.결과:pAAV-PON1-IRES-GFP매절화측서결과완전정학.반점잡교검측병독적적도위1.7×1010v.g/mL,RT-PCR결과현시병독전염EPCs후존재hPON1적표체.결론:성공구건료pAAV-PON1-IRES-GFP질립,포장출교고적도적rAAV-PON1,병차전염EPCs후가이검측도hPON1표체.
