河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
10期
126-130
,共5页
卢清侠%郭军庆%郝慧芳%杨苏珍%邢广旭%杨继飞%王世红%张改平
盧清俠%郭軍慶%郝慧芳%楊囌珍%邢廣旭%楊繼飛%王世紅%張改平
로청협%곽군경%학혜방%양소진%형엄욱%양계비%왕세홍%장개평
猪口蹄疫%合成肽疫苗%抗原多肽%串联表达%蛋白纯化%活性鉴定
豬口蹄疫%閤成肽疫苗%抗原多肽%串聯錶達%蛋白純化%活性鑒定
저구제역%합성태역묘%항원다태%천련표체%단백순화%활성감정
为获得含合成肽疫苗抗原多肽的重组表达蛋白,根据猪口蹄疫O型合成肽疫苗中抗原多肽的氨基酸序列,使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成该抗原多肽的双拷贝基因序列,并克隆至表达载体pET32a中,构建原核表达质粒pET32a - P2.将重组质粒转化BL21 (DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS - PAGE电泳和Western - blot分析.结果显示,在分子量27 kD处有1条明显的蛋白表达条带,且能被O型FMDV阳性血清识别.对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白几乎全部以可溶形式存在.表达蛋白经Ni- NTA树脂亲和纯化,SDS - PAGE显示纯化的目的蛋白在27 kD处有单一目的条带,具有较高的纯度.ELISA检测结果显示,纯化的重组蛋白具有较高的活性.结果表明,该抗原多肽的双拷贝串联重复序列在大肠杆菌中得到了可溶性高效表达,为开发诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础.
為穫得含閤成肽疫苗抗原多肽的重組錶達蛋白,根據豬口蹄疫O型閤成肽疫苗中抗原多肽的氨基痠序列,使用大腸桿菌偏好性密碼子人工閤成該抗原多肽的雙拷貝基因序列,併剋隆至錶達載體pET32a中,構建原覈錶達質粒pET32a - P2.將重組質粒轉化BL21 (DE3),經IPTG誘導錶達,收集誘導的菌液進行SDS - PAGE電泳和Western - blot分析.結果顯示,在分子量27 kD處有1條明顯的蛋白錶達條帶,且能被O型FMDV暘性血清識彆.對錶達產物進行可溶性分析,結果顯示,錶達蛋白幾乎全部以可溶形式存在.錶達蛋白經Ni- NTA樹脂親和純化,SDS - PAGE顯示純化的目的蛋白在27 kD處有單一目的條帶,具有較高的純度.ELISA檢測結果顯示,純化的重組蛋白具有較高的活性.結果錶明,該抗原多肽的雙拷貝串聯重複序列在大腸桿菌中得到瞭可溶性高效錶達,為開髮診斷試劑和基因工程疫苗奠定瞭基礎.
위획득함합성태역묘항원다태적중조표체단백,근거저구제역O형합성태역묘중항원다태적안기산서렬,사용대장간균편호성밀마자인공합성해항원다태적쌍고패기인서렬,병극륭지표체재체pET32a중,구건원핵표체질립pET32a - P2.장중조질립전화BL21 (DE3),경IPTG유도표체,수집유도적균액진행SDS - PAGE전영화Western - blot분석.결과현시,재분자량27 kD처유1조명현적단백표체조대,차능피O형FMDV양성혈청식별.대표체산물진행가용성분석,결과현시,표체단백궤호전부이가용형식존재.표체단백경Ni- NTA수지친화순화,SDS - PAGE현시순화적목적단백재27 kD처유단일목적조대,구유교고적순도.ELISA검측결과현시,순화적중조단백구유교고적활성.결과표명,해항원다태적쌍고패천련중복서렬재대장간균중득도료가용성고효표체,위개발진단시제화기인공정역묘전정료기출.
