CAJ | 학술논문

背景:膜联蛋白A1蛋白参与细胞的增殖和分化的调控.激素性股骨头坏死与骨髓间充质干细胞增殖和分化能力的改变相关.目的:观察沉默膜联蛋白A1基因对兔骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响.方法:将新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞分离培养后分为RNA干扰组,用携带针对膜联蛋白A1基因的短发夹RNA慢病毒载体LV-shANXA1感染骨髓间充质干细胞下调膜联蛋白A1基因的表达;阴性对照组,用携带无义基因序列的慢病毒载体LV-shANXA1-NC感染骨髓间充质干细胞;空白对照组,不加任何干预措施.结果与结论:纯化后的骨髓间充质干细胞CD44和CD105表达阳性率分别为97.2%和95.8%,而CD45阳性率为2.5%.经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50时,LV-shANXA1对骨髓间充质干细胞感染效率为80%;感染复数为100时,感染效率为95%.实时 PCR 和Western blot检测显示感染复数为50时,LV-shANXA1对膜联蛋白A1基因的沉默效率效率可达72.4%以上.膜联蛋白A1表达下调后,骨髓间充质干细胞出现明显生长抑制,在随后成骨分化诱导后,细胞的碱性磷酸酶染色阳性率和碱性磷酸酶活性明显降低,且茜素红染色呈阴性反应.表明沉默膜联蛋白A1基因降低骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力,这可能是激素性股骨头坏死发病机制之一.
배경:막련단백A1단백삼여세포적증식화분화적조공.격소성고골두배사여골수간충질간세포증식화분화능력적개변상관.목적:관찰침묵막련단백A1기인대토골수간충질간세포증식급성골분화능력적영향.방법:장신서란대백토적골수간충질간세포분리배양후분위RNA간우조,용휴대침대막련단백A1기인적단발협RNA만병독재체LV-shANXA1감염골수간충질간세포하조막련단백A1기인적표체;음성대조조,용휴대무의기인서렬적만병독재체LV-shANXA1-NC감염골수간충질간세포;공백대조조,불가임하간예조시.결과여결론:순화후적골수간충질간세포CD44화CD105표체양성솔분별위97.2%화95.8%,이CD45양성솔위2.5%.경표령매소사선후,감염복수위50시,LV-shANXA1대골수간충질간세포감염효솔위80%;감염복수위100시,감염효솔위95%.실시 PCR 화Western blot검측현시감염복수위50시,LV-shANXA1대막련단백A1기인적침묵효솔효솔가체72.4%이상.막련단백A1표체하조후,골수간충질간세포출현명현생장억제,재수후성골분화유도후,세포적감성린산매염색양성솔화감성린산매활성명현강저,차천소홍염색정음성반응.표명침묵막련단백A1기인강저골수간충질간세포증식급성골분화능력,저가능시격소성고골두배사발병궤제지일.