化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2012年
8期
51-55
,共5页
天蓝色链霉菌%RsrA%CFP%克隆%表达%圆二色性
天藍色鏈黴菌%RsrA%CFP%剋隆%錶達%圓二色性
천람색련매균%RsrA%CFP%극륭%표체%원이색성
以天蓝色链霉菌M145基因组作模板,扩增σR(sigR)的anti-sigR因子基因rsrA,得到了333 bp基因；以质粒pECFP-N1作模板,扩增青色荧光蛋白基因cfp,得到了744 bp基因.将两个基因融合串联,构建rsrA/cf p/pET-28a(+)融合表达质粒.利用荧光检测技术,确定大肠杆菌BL21 (DE3)在OD600为0.5时,用1 mmol·L-1 IPTG进行诱导能大量表达融合蛋白RsrA-CFP.用镍柱亲和层析分离纯化RsrA-CFP蛋白,并用SDS-PAGE鉴定其分子量为40 kD左右.利用圆二色性初步测定RsrA-CFP蛋白的CD值,经CDNN软件分析得到:螺旋结构占32.2％、平行结构占8.0％、反向平行结构占9.3％、β折叠占16.7％、无规则卷曲占34.4％,为RsrA蛋白的功能研究奠定了基础.
以天藍色鏈黴菌M145基因組作模闆,擴增σR(sigR)的anti-sigR因子基因rsrA,得到瞭333 bp基因；以質粒pECFP-N1作模闆,擴增青色熒光蛋白基因cfp,得到瞭744 bp基因.將兩箇基因融閤串聯,構建rsrA/cf p/pET-28a(+)融閤錶達質粒.利用熒光檢測技術,確定大腸桿菌BL21 (DE3)在OD600為0.5時,用1 mmol·L-1 IPTG進行誘導能大量錶達融閤蛋白RsrA-CFP.用鎳柱親和層析分離純化RsrA-CFP蛋白,併用SDS-PAGE鑒定其分子量為40 kD左右.利用圓二色性初步測定RsrA-CFP蛋白的CD值,經CDNN軟件分析得到:螺鏇結構佔32.2％、平行結構佔8.0％、反嚮平行結構佔9.3％、β摺疊佔16.7％、無規則捲麯佔34.4％,為RsrA蛋白的功能研究奠定瞭基礎.
이천람색련매균M145기인조작모판,확증σR(sigR)적anti-sigR인자기인rsrA,득도료333 bp기인；이질립pECFP-N1작모판,확증청색형광단백기인cfp,득도료744 bp기인.장량개기인융합천련,구건rsrA/cf p/pET-28a(+)융합표체질립.이용형광검측기술,학정대장간균BL21 (DE3)재OD600위0.5시,용1 mmol·L-1 IPTG진행유도능대량표체융합단백RsrA-CFP.용얼주친화층석분리순화RsrA-CFP단백,병용SDS-PAGE감정기분자량위40 kD좌우.이용원이색성초보측정RsrA-CFP단백적CD치,경CDNN연건분석득도:라선결구점32.2％、평행결구점8.0％、반향평행결구점9.3％、β절첩점16.7％、무규칙권곡점34.4％,위RsrA단백적공능연구전정료기출.
