中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2006年
12期
1084-1088
,共5页
刘家云%郝晓柯%李庆霞%黄红艳%马龙洋%温伟红%贾林涛%杨安钢
劉傢雲%郝曉柯%李慶霞%黃紅豔%馬龍洋%溫偉紅%賈林濤%楊安鋼
류가운%학효가%리경하%황홍염%마룡양%온위홍%가림도%양안강
肝炎病毒,乙型%RNA,小分子干扰%转染%聚合酶链反应
肝炎病毒,乙型%RNA,小分子榦擾%轉染%聚閤酶鏈反應
간염병독,을형%RNA,소분자간우%전염%취합매련반응
目的 构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响.方法 设计并合成针对HBV X区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG2 2.2.15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBV DNA.结果 成功构建了针对HBV X基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG2 2.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBV DNA拷贝数2个数量级.结论 载体产生的针对HBV X基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制.
目的 構建針對乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA錶達載體,觀察其對HBV基因錶達和複製的影響.方法 設計併閤成針對HBV X區基因的siRNA寡覈苷痠,經退火形成雙鏈後剋隆入pSUPER載體,構建成功的siRNA錶達載體與pTK-Hyg質粒共轉染穩定錶達HBV的HepG2 2.2.15細胞,潮黴素抗性篩選穫得穩定細胞剋隆,對所得細胞培養上清液中的HBsAg和HBeAg進行定量檢測,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測靶基因mRNA的抑製效果,熒光定量PCR檢測HBV DNA.結果 成功構建瞭針對HBV X基因的siRNA錶達載體pSUPER-X1和pSUPER-X2,兩種siRNA均能明顯抑製HepG2 2.2.15細胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑製率分彆為97%和88%,RT-PCR結果顯示HBV的mRNA錶達降低,熒光定量PCR結果證實siRNA能降低HBV DNA拷貝數2箇數量級.結論 載體產生的針對HBV X基因的siRNA能高效、特異地抑製HBV基因的錶達和複製.
목적 구건침대을형간염병독(HBV)X기인적siRNA표체재체,관찰기대HBV기인표체화복제적영향.방법 설계병합성침대HBV X구기인적siRNA과핵감산,경퇴화형성쌍련후극륭입pSUPER재체,구건성공적siRNA표체재체여pTK-Hyg질립공전염은정표체HBV적HepG2 2.2.15세포,조매소항성사선획득은정세포극륭,대소득세포배양상청액중적HBsAg화HBeAg진행정량검측,역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측파기인mRNA적억제효과,형광정량PCR검측HBV DNA.결과 성공구건료침대HBV X기인적siRNA표체재체pSUPER-X1화pSUPER-X2,량충siRNA균능명현억제HepG2 2.2.15세포적HBsAg화HBeAg분비,억제솔분별위97%화88%,RT-PCR결과현시HBV적mRNA표체강저,형광정량PCR결과증실siRNA능강저HBV DNA고패수2개수량급.결론 재체산생적침대HBV X기인적siRNA능고효、특이지억제HBV기인적표체화복제.
