生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
15-18
,共4页
张旭%苗林%方宏清%戴红梅%李树龙%沈明山%陈惠鹏
張旭%苗林%方宏清%戴紅梅%李樹龍%瀋明山%陳惠鵬
장욱%묘림%방굉청%대홍매%리수룡%침명산%진혜붕
胸腺素α1%乙酰化%乙酰转移酶RimL%Red重组
胸腺素α1%乙酰化%乙酰轉移酶RimL%Red重組
흉선소α1%을선화%을선전이매RimL%Red중조
目的:考察大肠杆菌乙酰转移酶RimL对胸腺素α1(Tα1)乙酰化修饰的影响.方法:构建含500 bp同源臂的卡那抗性基因打靶片段,利用Red同源重组系统,使大肠杆菌B121(DE3)的rimL基因插入失活,随后导入质粒pCP20去除抗性基因,构建突变菌株rimL-8121(DE3);将重组质粒pET-Tα1-L12分别转入出发菌株和突变菌株中进行表达,经固定金属离子亲和层析和反向高效液相层析后,将所得纯品进行质谱分析,精确测定相对分子质量.结果:PCR鉴定结果证明成功敲除rimL基因;质谱结果表明,rimL基因敲除菌中所表达的Tα1-L12融合蛋白与出发菌株一样,均有部分乙酰化修饰.结论:Tα1的乙酰化修饰并不依赖于RimL.
目的:攷察大腸桿菌乙酰轉移酶RimL對胸腺素α1(Tα1)乙酰化脩飾的影響.方法:構建含500 bp同源臂的卡那抗性基因打靶片段,利用Red同源重組繫統,使大腸桿菌B121(DE3)的rimL基因插入失活,隨後導入質粒pCP20去除抗性基因,構建突變菌株rimL-8121(DE3);將重組質粒pET-Tα1-L12分彆轉入齣髮菌株和突變菌株中進行錶達,經固定金屬離子親和層析和反嚮高效液相層析後,將所得純品進行質譜分析,精確測定相對分子質量.結果:PCR鑒定結果證明成功敲除rimL基因;質譜結果錶明,rimL基因敲除菌中所錶達的Tα1-L12融閤蛋白與齣髮菌株一樣,均有部分乙酰化脩飾.結論:Tα1的乙酰化脩飾併不依賴于RimL.
목적:고찰대장간균을선전이매RimL대흉선소α1(Tα1)을선화수식적영향.방법:구건함500 bp동원비적잡나항성기인타파편단,이용Red동원중조계통,사대장간균B121(DE3)적rimL기인삽입실활,수후도입질립pCP20거제항성기인,구건돌변균주rimL-8121(DE3);장중조질립pET-Tα1-L12분별전입출발균주화돌변균주중진행표체,경고정금속리자친화층석화반향고효액상층석후,장소득순품진행질보분석,정학측정상대분자질량.결과:PCR감정결과증명성공고제rimL기인;질보결과표명,rimL기인고제균중소표체적Tα1-L12융합단백여출발균주일양,균유부분을선화수식.결론:Tα1적을선화수식병불의뢰우RimL.
