福建农林大学学报（自然科学版）
福建農林大學學報（自然科學版）
복건농림대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2009年
3期
265-270
,共6页
金艳冬%黄小红%王长康%李文迹%胡小寰
金豔鼕%黃小紅%王長康%李文跡%鬍小寰
금염동%황소홍%왕장강%리문적%호소환
河田鸡%艾维茵肉鸡%睾丸%N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)%特性
河田鷄%艾維茵肉鷄%睪汍%N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)%特性
하전계%애유인육계%고환%N-을선-β-D-안기포도당감매(NAGase)%특성
河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U·mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U·mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50 ℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30 ℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319 mmol·L-1,最大反应速度(Vm)分别为9.438、6.238 μmol·L-1·min-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85.74、73.47 kJ·mol-1.
河田鷄和艾維茵肉鷄的睪汍,經硫痠銨分級沉澱、DEAE-32離子交換柱層析,穫得比活力為54.84 U·mg-1,純化倍數為8.86的河田鷄睪汍N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)製劑.艾維茵肉鷄睪汍NAGase經Sephacry S-300凝膠過濾層析柱進一步純化,穫得比活力為171.50 U·mg-1,純化倍數為19.8倍的NAGase製劑.以對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)為底物,研究酶催化底物水解的反應動力學.結果錶明:河田鷄和艾維茵肉鷄睪汍NAGase的最適pH分彆為5.6、5.7,最適溫度分彆為55、50 ℃;NAGase分彆在pH為3.0-9.2、4.0-9.2及溫度為10-60、10-30 ℃下能保持穩定;NAGase酶促反應動力學均符閤米氏雙麯線方程,測得米氏常數(Km)分彆為0.223、0.319 mmol·L-1,最大反應速度(Vm)分彆為9.438、6.238 μmol·L-1·min-1;NAGase催化pNP-NAG反應的活化能分彆為85.74、73.47 kJ·mol-1.
하전계화애유인육계적고환,경류산안분급침정、DEAE-32리자교환주층석,획득비활력위54.84 U·mg-1,순화배수위8.86적하전계고환N-을선-β-D-안기포도당감매(NAGase)제제.애유인육계고환NAGase경Sephacry S-300응효과려층석주진일보순화,획득비활력위171.50 U·mg-1,순화배수위19.8배적NAGase제제.이대초기분-N-을선-β-D-안기포도당감(pNP-NAG)위저물,연구매최화저물수해적반응동역학.결과표명:하전계화애유인육계고환NAGase적최괄pH분별위5.6、5.7,최괄온도분별위55、50 ℃;NAGase분별재pH위3.0-9.2、4.0-9.2급온도위10-60、10-30 ℃하능보지은정;NAGase매촉반응동역학균부합미씨쌍곡선방정,측득미씨상수(Km)분별위0.223、0.319 mmol·L-1,최대반응속도(Vm)분별위9.438、6.238 μmol·L-1·min-1;NAGase최화pNP-NAG반응적활화능분별위85.74、73.47 kJ·mol-1.
