四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2011年
5期
705-710,封2
,共7页
郑立%李娟%郭亚伟%柳峰松
鄭立%李娟%郭亞偉%柳峰鬆
정립%리연%곽아위%류봉송
家蝇%家蝇溶菌酶2%基因克隆%基因定量%重组表达
傢蠅%傢蠅溶菌酶2%基因剋隆%基因定量%重組錶達
가승%가승용균매2%기인극륭%기인정량%중조표체
溶菌酶(lysozyme)作为抗菌肽重要一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用.本文通过家蝇EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的lysozyme 2基因(Md-lysozyme 2,MdL2)全长516 bp的cDNA序列.MdL2包含429 bp的开放阅读框,编码142个氨基酸残基,推导的氨基酸序列N端包括加个氨基酸残基的信号肽,成熟肽由122个氨基酸残基组成,理论分子量为13.89 kD,理论等电点为6.45,有8个半胱氨酸组成4对分子内二硫键.实时荧光定量PCR结果显示大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别刺激后,家蝇幼虫体内MdL2基因的表达模式发生了非常相似的变化.在刺激3～12 h表达下调,12～24 h出现一个短暂的恢复,在刺激24 h后表达又开始下调.不同组织定量PCR结果表明MdL2表达量在肠和血细胞中较高,而在表皮和脂肪体中较低.MdL2成熟肽编码序列被克隆人pET-DsbA表达载体,并转化大肠杆菌后得到高效表达.
溶菌酶(lysozyme)作為抗菌肽重要一員,在昆蟲先天免疫繫統中起著重要作用.本文通過傢蠅EST序列篩選併結閤RACE技術剋隆瞭傢蠅Musca domestica的lysozyme 2基因(Md-lysozyme 2,MdL2)全長516 bp的cDNA序列.MdL2包含429 bp的開放閱讀框,編碼142箇氨基痠殘基,推導的氨基痠序列N耑包括加箇氨基痠殘基的信號肽,成熟肽由122箇氨基痠殘基組成,理論分子量為13.89 kD,理論等電點為6.45,有8箇半胱氨痠組成4對分子內二硫鍵.實時熒光定量PCR結果顯示大腸桿菌和金黃色葡萄毬菌分彆刺激後,傢蠅幼蟲體內MdL2基因的錶達模式髮生瞭非常相似的變化.在刺激3～12 h錶達下調,12～24 h齣現一箇短暫的恢複,在刺激24 h後錶達又開始下調.不同組織定量PCR結果錶明MdL2錶達量在腸和血細胞中較高,而在錶皮和脂肪體中較低.MdL2成熟肽編碼序列被剋隆人pET-DsbA錶達載體,併轉化大腸桿菌後得到高效錶達.
용균매(lysozyme)작위항균태중요일원,재곤충선천면역계통중기착중요작용.본문통과가승EST서렬사선병결합RACE기술극륭료가승Musca domestica적lysozyme 2기인(Md-lysozyme 2,MdL2)전장516 bp적cDNA서렬.MdL2포함429 bp적개방열독광,편마142개안기산잔기,추도적안기산서렬N단포괄가개안기산잔기적신호태,성숙태유122개안기산잔기조성,이론분자량위13.89 kD,이론등전점위6.45,유8개반광안산조성4대분자내이류건.실시형광정량PCR결과현시대장간균화금황색포도구균분별자격후,가승유충체내MdL2기인적표체모식발생료비상상사적변화.재자격3～12 h표체하조,12～24 h출현일개단잠적회복,재자격24 h후표체우개시하조.불동조직정량PCR결과표명MdL2표체량재장화혈세포중교고,이재표피화지방체중교저.MdL2성숙태편마서렬피극륭인pET-DsbA표체재체,병전화대장간균후득도고효표체.
