中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
11期
113-116
,共4页
王素华%蔡渭明%李群%杜爱芳
王素華%蔡渭明%李群%杜愛芳
왕소화%채위명%리군%두애방
双芽巴贝斯虫%环介导等温扩增技术%检测%cytb基因
雙芽巴貝斯蟲%環介導等溫擴增技術%檢測%cytb基因
쌍아파패사충%배개도등온확증기술%검측%cytb기인
为提高双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)检出率,本研究采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种快速、灵敏、特异的B.bigemina检测方法.根据GenBank上公布的Babesia bigemina细胞色素b(Cytochrome b,cytb)基因序列,设计4条特异地识别B.bigem ina的cytb基因6个特殊区域的LAMP引物,优化反应体系和条件,在Bst DNA聚合酶的作用下,65℃反应60 min,加入SYBR Green Ⅰ后观察.结果表明,该LAMP检测方法特异性强,与牛巴贝斯虫(Babesia bovis)等DNA不发生交叉反应；敏感性高,对B.bigemina的cytb基因最小检测值为0.085 fg/μL,是一般PCR方法的1000倍.该方法具有简单、快速、低成本的特点,可用于B.bigemina的基层现场快速检测.
為提高雙芽巴貝斯蟲(Babesia bigemina)檢齣率,本研究採用環介導等溫擴增技術(LAMP)建立一種快速、靈敏、特異的B.bigemina檢測方法.根據GenBank上公佈的Babesia bigemina細胞色素b(Cytochrome b,cytb)基因序列,設計4條特異地識彆B.bigem ina的cytb基因6箇特殊區域的LAMP引物,優化反應體繫和條件,在Bst DNA聚閤酶的作用下,65℃反應60 min,加入SYBR Green Ⅰ後觀察.結果錶明,該LAMP檢測方法特異性彊,與牛巴貝斯蟲(Babesia bovis)等DNA不髮生交扠反應；敏感性高,對B.bigemina的cytb基因最小檢測值為0.085 fg/μL,是一般PCR方法的1000倍.該方法具有簡單、快速、低成本的特點,可用于B.bigemina的基層現場快速檢測.
위제고쌍아파패사충(Babesia bigemina)검출솔,본연구채용배개도등온확증기술(LAMP)건립일충쾌속、령민、특이적B.bigemina검측방법.근거GenBank상공포적Babesia bigemina세포색소b(Cytochrome b,cytb)기인서렬,설계4조특이지식별B.bigem ina적cytb기인6개특수구역적LAMP인물,우화반응체계화조건,재Bst DNA취합매적작용하,65℃반응60 min,가입SYBR Green Ⅰ후관찰.결과표명,해LAMP검측방법특이성강,여우파패사충(Babesia bovis)등DNA불발생교차반응；민감성고,대B.bigemina적cytb기인최소검측치위0.085 fg/μL,시일반PCR방법적1000배.해방법구유간단、쾌속、저성본적특점,가용우B.bigemina적기층현장쾌속검측.
