四川大学学报(自然科学版)
四川大學學報(自然科學版)
사천대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY
2004年
2期
431-435
,共5页
粗毛栓菌%PAG培养基%蓝色漆酶%纯化%性质
粗毛栓菌%PAG培養基%藍色漆酶%純化%性質
조모전균%PAG배양기%람색칠매%순화%성질
作者对粗毛栓菌(Trametes gallica)在PAG培养基条件下摇瓶培养产生漆酶的情况进行了研究.15d左右达到产酶高峰,随后进入平台期.对15d产生的漆酶进行分离纯化.4L发酵液经硫酸铵沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析和Sephadex G-100柱层析,漆酶被纯化了怂36.9倍.经SDS-PAGE验证为一条带,表观分子量约为60,000Da.纯化漆酶是一种含糖量6%的糖蛋白,且在605nm处具有蓝色漆酶Ⅰ型铜离子典型的吸收峰.以ABTS,DMP和愈创木酚为底物,反应的最适pH值分别为2.2,3.0和4.0;Km值分别为0.172×10-2,0.51,0.48mmol/L.以ABTS为底物,最适反应温度为70℃.在pH7～9处理24h,纯化漆酶仍保持较高活性.EDTA,卤素离子,NaCN和NaN3对酶活有抑制作用,其中NaN3是最强的抑制剂.纯化的蓝色漆酶不具有氨酸酶活性,但能够氧化非传统底物酚红.
作者對粗毛栓菌(Trametes gallica)在PAG培養基條件下搖瓶培養產生漆酶的情況進行瞭研究.15d左右達到產酶高峰,隨後進入平檯期.對15d產生的漆酶進行分離純化.4L髮酵液經硫痠銨沉澱,DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析和Sephadex G-100柱層析,漆酶被純化瞭慫36.9倍.經SDS-PAGE驗證為一條帶,錶觀分子量約為60,000Da.純化漆酶是一種含糖量6%的糖蛋白,且在605nm處具有藍色漆酶Ⅰ型銅離子典型的吸收峰.以ABTS,DMP和愈創木酚為底物,反應的最適pH值分彆為2.2,3.0和4.0;Km值分彆為0.172×10-2,0.51,0.48mmol/L.以ABTS為底物,最適反應溫度為70℃.在pH7～9處理24h,純化漆酶仍保持較高活性.EDTA,滷素離子,NaCN和NaN3對酶活有抑製作用,其中NaN3是最彊的抑製劑.純化的藍色漆酶不具有氨痠酶活性,但能夠氧化非傳統底物酚紅.
작자대조모전균(Trametes gallica)재PAG배양기조건하요병배양산생칠매적정황진행료연구.15d좌우체도산매고봉,수후진입평태기.대15d산생적칠매진행분리순화.4L발효액경류산안침정,DEAE-Sepharose Fast Flow주층석화Sephadex G-100주층석,칠매피순화료종36.9배.경SDS-PAGE험증위일조대,표관분자량약위60,000Da.순화칠매시일충함당량6%적당단백,차재605nm처구유람색칠매Ⅰ형동리자전형적흡수봉.이ABTS,DMP화유창목분위저물,반응적최괄pH치분별위2.2,3.0화4.0;Km치분별위0.172×10-2,0.51,0.48mmol/L.이ABTS위저물,최괄반응온도위70℃.재pH7～9처리24h,순화칠매잉보지교고활성.EDTA,서소리자,NaCN화NaN3대매활유억제작용,기중NaN3시최강적억제제.순화적람색칠매불구유안산매활성,단능구양화비전통저물분홍.
