武汉大学学报（理学版）
武漢大學學報（理學版）
무한대학학보（이학판）
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2006年
6期
745-750
,共6页
王友亮%金卫华%曹军卫%姚保利%雷铭
王友亮%金衛華%曹軍衛%姚保利%雷銘
왕우량%금위화%조군위%요보리%뢰명
细菌视紫红质%重叠PCR%质子通道%光循环
細菌視紫紅質%重疊PCR%質子通道%光循環
세균시자홍질%중첩PCR%질자통도%광순배
用重叠PCR的方法,定点突变细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,BR),克隆到单突变体BRD96N和双突变体BRD38R/D96N的基因,同源转化盐沼盐杆菌(Halobacterium salinarium) L33(BR-),表达突变蛋白BRD96N和BRD38R/D96N.通过显微视频方法对突变BR的M态光致变色特性进行记录,BRD38R/D96N 的M态寿命为5 s,约为BRD96N (M态寿命为3 s)的1.7倍.对突变体的激光共聚焦拉曼光谱测定发现,在BRD96N中,1 170 cm-1下移到1 171 cm-1,1 258 cm-1上移到1 255 cm-1,而BRD38R/D96N中1 170 cm-1下移到1 173 cm-1;1 258 cm-1上移到1 252 cm-1,而且BRD38R/D96N与BRD96N相比,1 186 cm-1处的峰明显增强.近紫外区圆二色谱显示,两种突变体近紫外区的正负带虽然没有太大差别,但288 nm和290 nm处的极峰却差别显著.所有这些研究结果表明,细菌视紫红质Asp38(D38)突变为Arg(R)可以延长其光循环后半程M态和N态的寿命.
用重疊PCR的方法,定點突變細菌視紫紅質(bacteriorhodopsin,BR),剋隆到單突變體BRD96N和雙突變體BRD38R/D96N的基因,同源轉化鹽沼鹽桿菌(Halobacterium salinarium) L33(BR-),錶達突變蛋白BRD96N和BRD38R/D96N.通過顯微視頻方法對突變BR的M態光緻變色特性進行記錄,BRD38R/D96N 的M態壽命為5 s,約為BRD96N (M態壽命為3 s)的1.7倍.對突變體的激光共聚焦拉曼光譜測定髮現,在BRD96N中,1 170 cm-1下移到1 171 cm-1,1 258 cm-1上移到1 255 cm-1,而BRD38R/D96N中1 170 cm-1下移到1 173 cm-1;1 258 cm-1上移到1 252 cm-1,而且BRD38R/D96N與BRD96N相比,1 186 cm-1處的峰明顯增彊.近紫外區圓二色譜顯示,兩種突變體近紫外區的正負帶雖然沒有太大差彆,但288 nm和290 nm處的極峰卻差彆顯著.所有這些研究結果錶明,細菌視紫紅質Asp38(D38)突變為Arg(R)可以延長其光循環後半程M態和N態的壽命.
용중첩PCR적방법,정점돌변세균시자홍질(bacteriorhodopsin,BR),극륭도단돌변체BRD96N화쌍돌변체BRD38R/D96N적기인,동원전화염소염간균(Halobacterium salinarium) L33(BR-),표체돌변단백BRD96N화BRD38R/D96N.통과현미시빈방법대돌변BR적M태광치변색특성진행기록,BRD38R/D96N 적M태수명위5 s,약위BRD96N (M태수명위3 s)적1.7배.대돌변체적격광공취초랍만광보측정발현,재BRD96N중,1 170 cm-1하이도1 171 cm-1,1 258 cm-1상이도1 255 cm-1,이BRD38R/D96N중1 170 cm-1하이도1 173 cm-1;1 258 cm-1상이도1 252 cm-1,이차BRD38R/D96N여BRD96N상비,1 186 cm-1처적봉명현증강.근자외구원이색보현시,량충돌변체근자외구적정부대수연몰유태대차별,단288 nm화290 nm처적겁봉각차별현저.소유저사연구결과표명,세균시자홍질Asp38(D38)돌변위Arg(R)가이연장기광순배후반정M태화N태적수명.
