中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2007年
8期
575-578,583
,共5页
杨勇%任玉红%梁宝怀%朱雅宁%梁志选
楊勇%任玉紅%樑寶懷%硃雅寧%樑誌選
양용%임옥홍%량보부%주아저%량지선
鸡传染性贫血病毒%vp1%原核表达%酶联免疫吸附实验
鷄傳染性貧血病毒%vp1%原覈錶達%酶聯免疫吸附實驗
계전염성빈혈병독%vp1%원핵표체%매련면역흡부실험
从组织病料中提取CAV核酸,根据GenBank上发表的序列设计两对引物,分别扩增出vp1的139bp～83bp和547bp～1337bp两个基因片段,然后分别将其克隆到原核表达载体PMXB10上,经PCR和酶切鉴定,证明成功构建了重组表达载体PMXB10-vp1C和PMXB10-vp1D.在0.3 mM的IPTG诱导下,融合蛋白在大肠杆菌ER2566以分泌型得到大量表达,经大量表达后,用几丁质柱挂柱切割纯化后,得到切割蛋白E、F.在Westem blot免疫分析印迹中,两组融合蛋白和切割蛋白与CAV阳性血清均能发生特异性反应.用ELISA方法检验,纯化的两组蛋白与CAV阳性血清均能发生特异性反应.用两组蛋白免疫SPF鸡后,用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性,表明两组蛋白均可诱发机体产生抗CAV的抗体.
從組織病料中提取CAV覈痠,根據GenBank上髮錶的序列設計兩對引物,分彆擴增齣vp1的139bp～83bp和547bp～1337bp兩箇基因片段,然後分彆將其剋隆到原覈錶達載體PMXB10上,經PCR和酶切鑒定,證明成功構建瞭重組錶達載體PMXB10-vp1C和PMXB10-vp1D.在0.3 mM的IPTG誘導下,融閤蛋白在大腸桿菌ER2566以分泌型得到大量錶達,經大量錶達後,用幾丁質柱掛柱切割純化後,得到切割蛋白E、F.在Westem blot免疫分析印跡中,兩組融閤蛋白和切割蛋白與CAV暘性血清均能髮生特異性反應.用ELISA方法檢驗,純化的兩組蛋白與CAV暘性血清均能髮生特異性反應.用兩組蛋白免疫SPF鷄後,用全病毒ELISA試劑盒檢測血清呈暘性,錶明兩組蛋白均可誘髮機體產生抗CAV的抗體.
종조직병료중제취CAV핵산,근거GenBank상발표적서렬설계량대인물,분별확증출vp1적139bp～83bp화547bp～1337bp량개기인편단,연후분별장기극륭도원핵표체재체PMXB10상,경PCR화매절감정,증명성공구건료중조표체재체PMXB10-vp1C화PMXB10-vp1D.재0.3 mM적IPTG유도하,융합단백재대장간균ER2566이분비형득도대량표체,경대량표체후,용궤정질주괘주절할순화후,득도절할단백E、F.재Westem blot면역분석인적중,량조융합단백화절할단백여CAV양성혈청균능발생특이성반응.용ELISA방법검험,순화적량조단백여CAV양성혈청균능발생특이성반응.용량조단백면역SPF계후,용전병독ELISA시제합검측혈청정양성,표명량조단백균가유발궤체산생항CAV적항체.
